Question

【題目】科研人員從云杉卷葉蛾越冬幼蟲中分離出一種超強(qiáng)的抗凍活性基因sbwAFP，并導(dǎo)入番茄植株中，使番茄植株獲得抗凍性，下圖表示重組質(zhì)粒的構(gòu)建和篩選過(guò)程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（AmpF為氨芐青霉素抗性基因，TetF為四環(huán)素抗性基因）

（1）對(duì)獲得的sbwAFP基因通常用__________技術(shù)以擴(kuò)增數(shù)量。分析圖示，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選擇限制酶__________和______________切割目的基因和質(zhì)粒。

（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌前，應(yīng)用_________處理大腸桿菌,以制備感受態(tài)細(xì)胞，為了篩選將重組質(zhì)粒，可將大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況為__________________________________。

（3）將成功導(dǎo)入了目的基因的番茄細(xì)胞培育成完整植株幼苗所采用的技術(shù)是_____________，從細(xì)胞的角度分析，所依據(jù)的生物學(xué)原理是_____________________。

（4）如何從個(gè)體水平檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)？__________________________。

Answer 1

【答案】PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）Bgl IICla ICa2+在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能正常生長(zhǎng),在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能正常生長(zhǎng)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞的全能性將番茄植株置于冷凍的環(huán)境下，觀察其是否能正常生長(zhǎng)發(fā)育

【解析】

（1）擴(kuò)增目的基因可以用PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)。根據(jù)圖示，選擇限制酶BglII和 ClaI可以在不破壞目的基因的前提下，將目的基因從供體DNA中切出，并使目的基因能插入四環(huán)素抗性基因中。

（2）制備感受態(tài)細(xì)胞，應(yīng)用Ca2+ 處理大腸桿菌。重組質(zhì)粒中，四環(huán)素抗性基因被破壞，青霉素抗性基因被保留，成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基可以生長(zhǎng)。

（3）成功導(dǎo)入了目的基因的番茄細(xì)胞可以通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)培育成完整植株幼苗，所依據(jù)的生物學(xué)原理是植物細(xì)胞的全能性。

（4）從個(gè)體水平檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)，可以將番茄植株置于冷凍的環(huán)境下，觀察其是否能正常生長(zhǎng)發(fā)育。