Question

根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題：
（1）限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有

 

和

 

．
（2）質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如圖所示．為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是

 

．
（3）按其來(lái)源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即

 

DNA連接酶和

 

DNA連接酶．
（4）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是

 

，產(chǎn)物是

 

．若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用

 

技術(shù)．
（5）基因工程中除質(zhì)粒外，

 

和

 

也可作為運(yùn)載體．
（6）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種．DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶．基因工程常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．

解答： 解：（1）經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶切割后能形成兩種類型的末端，即平末端和黏性末端．
（2）為了便于相連，兩種不同限制酶切割之后所產(chǎn)生的黏性末端必須相同．
（3）DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶．這二者都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時(shí)的效率比較低．
（4）反轉(zhuǎn)錄是以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄先合成單鏈DNA，再合成雙鏈DNA，利用PCR技術(shù)進(jìn)行大量擴(kuò)增．
（5）基因工程常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．
（6）當(dāng)受體細(xì)胞是細(xì)菌時(shí)，為了增大導(dǎo)入的成功率，常用Ca²⁺處理，得到感受態(tài)細(xì)胞，此時(shí)細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的通透性增大，容易吸收重組質(zhì)粒．未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱．
故答案為：
（1）黏性末端   平末端
（2）切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRI切割產(chǎn)生的相同
（3）大腸桿菌   T4
（4）mRNA（或RNA）  cDNA（或DNA）   PCR
（5）噬菌體   動(dòng)植物病毒
（6）未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，重點(diǎn)考查基因工程的工具，只要考生識(shí)記基因工程三種工具的相關(guān)知識(shí)即可，屬于考綱識(shí)記層次的考查，這需要考生在平行的學(xué)習(xí)過(guò)程中構(gòu)建相關(guān)知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)．