Question

【題目】回答下列關(guān)于生物技術(shù)實(shí)踐的有關(guān)問題。

（1）為篩選胞外蛋白酶分泌型菌種，一般從___________（A． 果園中 B． 肉類加工廠周圍 C． 酒廠周圍 D． 草炭土）獲得土樣，用經(jīng)___________的蒸餾水稀釋，備用。

（2）培養(yǎng)基的配制和滅菌：根據(jù)目標(biāo)微生物的特性，配制相應(yīng)的培養(yǎng)基，裝入三角瓶中蓋上封口膜后，口朝上豎直擺放于高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行滅菌。其中封口膜的作用是_______________________。影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有溫度、壓力、時(shí)間，以及_______________________等（答2點(diǎn)即可），若對含葡萄糖的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，通常設(shè)置的壓力要求是_______________________。

（3）擴(kuò)大培養(yǎng)：將土壤稀釋液接種于以白蛋白作為唯一____________的液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)使微生物繁殖較快的原因是____________________________________________（答2點(diǎn)即可）。

（4）分離純化：將菌液稀釋成10-3、10-4、10-5、10-6濃度的稀釋液，取各濃度稀釋液0．1mL分別涂布到LB培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。將培養(yǎng)皿倒置放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，觀察菌落數(shù)。其中涂布完成后的玻璃刮刀需要進(jìn)行的處理是___________________________________。

Answer 1

【答案】B 高壓蒸汽滅菌 既通氣又不使雜菌進(jìn)入 滅菌材料和數(shù)量、鍋內(nèi)空氣含量 500mg/cm2壓力 氮源 供氧、充分利用培養(yǎng)基 灼燒并冷卻

【解析】

1. 實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達(dá)到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15~30min。

2. 培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。稀釋平板法在培養(yǎng)基上分離、培養(yǎng)出微生物的單個(gè)菌落，以便于計(jì)數(shù)、移植、分離，從而達(dá)到純培養(yǎng)的目的。

（1）肉類的主要成分是蛋白質(zhì)，因此為篩選胞外蛋白酶分泌型菌種，一般從B肉類加工廠周圍獲得土樣，用高壓蒸汽滅菌的蒸餾水稀釋，涂布到含有淀粉的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

（2）高壓蒸汽滅菌過程中封口膜的作用是既通氣又不使雜菌進(jìn)入，影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有溫度、壓力、時(shí)間，以及滅菌材料和數(shù)量、鍋內(nèi)空氣含量等，若對含葡萄糖的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，通常設(shè)置的壓力要求是500mg/cm2壓力。

（3）擴(kuò)大培養(yǎng)：蛋白酶可以專一性分解蛋白質(zhì)，因此根據(jù)篩選菌種的特點(diǎn)，將土壤稀釋液接種于以白蛋白作為唯一氮源的液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)可以使供氧充分，同時(shí)使微生物能夠充分利用培養(yǎng)基中的養(yǎng)分，使微生物繁殖較快。

（4）分離純化：利用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離純化。將菌液稀釋成10-3、10-4、10-5、10-6濃度的稀釋液，取各濃度稀釋液0．1mL分別涂布到LB培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。將培養(yǎng)皿倒置放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，觀察菌落數(shù)。其中涂布完成后的玻璃刮刀需要進(jìn)行灼燒滅菌后并冷卻處理。