Question

【題目】自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸�物時(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問題：

(1)實(shí)驗(yàn)步驟

①制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。

②為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，應(yīng)選用________________________法接種樣品。

③適宜溫度下培養(yǎng)。

(2)結(jié)果分析

①測(cè)定大腸桿菌數(shù)目時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，與事實(shí)更加接近的是__________。

A.一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230

B.兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和260，取平均值240

C.三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是400、212和256，取平均值289

D.四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、260、240和250，取平均值240

②一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為212，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)約是(涂布平板時(shí)所用的稀釋液體積為0.2 mL)_________________________個(gè)。

③用這種方法測(cè)定菌體密度時(shí)，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量__________(填“多”或“少”)，因?yàn)?/span>______________________________________________________________。

(3)自來(lái)水中的大腸桿菌數(shù)目少，為了測(cè)定其數(shù)目，采用的測(cè)定方法是____________________。根據(jù)該方法計(jì)數(shù)大腸桿菌數(shù)目時(shí)，其培養(yǎng)基中常加入伊紅美藍(lán)。計(jì)數(shù)基本原理是__________________________

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板 D 1.06×109 多 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 濾膜法 將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量

【解析】

1、平板劃線法是接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線之后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體-菌落；稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)獲得由單細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落。
2、對(duì)微生物進(jìn)行分離、計(jì)數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，往往選取30～300的平板，取至少三個(gè)平板的平均值，每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)；由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)平板上觀察的是一個(gè)菌落，因此估算的菌落數(shù)少于實(shí)際菌落數(shù)。

（1）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于微生物的計(jì)數(shù)，因此為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，應(yīng)選用稀釋涂布平板法接種樣品。

（2）①測(cè)定的大腸桿菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，由于在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性；并且為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板計(jì)數(shù)，因此D選項(xiàng)的結(jié)果最可靠。即D正確，ABC錯(cuò)誤。
②在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為212，涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL，因此每毫升樣品中的菌落數(shù)是212÷0.2×106=1.06×109。
③當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落，因此用這種方法測(cè)定得密度偏低，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)多。

（3）自來(lái)水中的大腸桿菌數(shù)目少，為了測(cè)定其數(shù)目，采用的測(cè)定方法是濾膜法。將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。