Question

【題目】自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進行數(shù)量的測定。下面是對大腸桿菌進行數(shù)量測定的實驗，請回答有關(guān)問題：

(1)實驗步驟

①制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。

②為了得到更加準確的結(jié)果，應(yīng)選用________________________法接種樣品。

③適宜溫度下培養(yǎng)。

(2)結(jié)果分析

①測定大腸桿菌數(shù)目時，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結(jié)果，與事實更加接近的是__________。

A.一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是230

B.兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是220和260，取平均值240

C.三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是400、212和256，取平均值289

D.四個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是210、260、240和250，取平均值240

②一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上測得平板上菌落數(shù)的平均值為212，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)約是(涂布平板時所用的稀釋液體積為0.2 mL)_________________________個。

③用這種方法測定菌體密度時，實際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量__________(填“多”或“少”)，因為______________________________________________________________。

(3)自來水中的大腸桿菌數(shù)目少，為了測定其數(shù)目，采用的測定方法是____________________。根據(jù)該方法計數(shù)大腸桿菌數(shù)目時，其培養(yǎng)基中常加入伊紅美藍。計數(shù)基本原理是__________________________

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板 D 1.06×109 多 當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 濾膜法 將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量

【解析】

1、平板劃線法是接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線之后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的子細胞群體-菌落；稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)獲得由單細胞繁殖而來的菌落。
2、對微生物進行分離、計數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細菌數(shù)時，往往選取30～300的平板，取至少三個平板的平均值，每毫升樣品中的細菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)；由于當兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落，因此估算的菌落數(shù)少于實際菌落數(shù)。

（1）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于微生物的計數(shù)，因此為了得到更加準確的結(jié)果，應(yīng)選用稀釋涂布平板法接種樣品。

（2）①測定的大腸桿菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結(jié)果，由于在設(shè)計實驗時，一般要涂布至少三個平板作為重復(fù)組，才能增強實驗的說服力與準確性；并且為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板計數(shù)，因此D選項的結(jié)果最可靠。即D正確，ABC錯誤。
②在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為212，涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2mL，因此每毫升樣品中的菌落數(shù)是212÷0.2×106=1.06×109。
③當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落，因此用這種方法測定得密度偏低，實際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)多。

（3）自來水中的大腸桿菌數(shù)目少，為了測定其數(shù)目，采用的測定方法是濾膜法。將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。