Question

【題目】乳酸菌等微生物與我們生活息息相關(guān)。請回答下列相關(guān)問題。

（1）若要純化培養(yǎng)乳酸菌，在配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時(shí)，一般還要加入瓊脂，它是一種從紅藻中提取的多糖，加入瓊脂作為_______。在制作此培養(yǎng)基時(shí)還要滿足微生物對特殊營養(yǎng)物質(zhì)的需求，例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加_______，制備培養(yǎng)基的操作順序是：計(jì)算→稱量→_______→倒平板，培養(yǎng)基中的(NH4)2CO3是否能為乳酸菌提供碳源并說明原因___________________________。

（2）純化微生物時(shí)，可采用___________________兩種最常用的方法進(jìn)行接種。為了能鑒別乳酸菌菌落，往往在配制培養(yǎng)基時(shí)加入碳酸鈣，推測其原因是______________________________________。有些鑒別培養(yǎng)基可在培養(yǎng)基中加入指示劑，例如分解尿素的細(xì)菌在添加_____指示劑的培養(yǎng)基上會(huì)顯示出特定的顏色；在鑒定大腸桿菌時(shí)在培養(yǎng)基中加入_______。制作泡菜時(shí)，要檢測亞硝酸鹽的含量，其原理為在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生_____反應(yīng)，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成______色染料。純化后的菌可在-20℃長期保存時(shí)，應(yīng)采用______的方法對菌種進(jìn)行長期保藏。

（3）若甲同學(xué)選取一定體積的乳酸菌菌液，進(jìn)行梯度稀釋，若將103倍的稀釋樣液接種在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板上菌落數(shù)分別是200、180、220。如果需要據(jù)此計(jì)算出乳酸菌的密度，還需要知道的一個(gè)重要數(shù)據(jù)是_______。另一同學(xué)乙涂布了4個(gè)平板，數(shù)值為177,193,185；其中一個(gè)空白對照平板出現(xiàn)了12個(gè)菌落，乙同學(xué)將173（185-12）個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法是否正確，并說明你的原因。___________________________________________。

Answer 1

【答案】凝固劑 維生素 溶化→滅菌 不能，乳酸菌為異養(yǎng)生物只能利用含碳有機(jī)物 平板劃線法或稀釋涂布平板法 乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，形成透明圈 酚紅 伊紅-美藍(lán) 重氮化 玫瑰紅 甘油管藏 接種時(shí)所用樣液的體積 不正確，空白培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落說明被污染需重新制作培養(yǎng)并計(jì)數(shù)

【解析】

1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求，對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時(shí)并不是起單一方面的作用。
2、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）在配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時(shí)，一般還要加入瓊脂，其目的是作為凝固劑；乳酸桿菌的培養(yǎng)基中需要加入維生素；制備培養(yǎng)基的操作順序是：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板；異養(yǎng)生物只能利用含碳有機(jī)物，因此(NH4)2CO3是不能為乳酸菌提供碳源。

（2）微生物常見的接種的方法有①平板劃線法、②稀釋涂布平板法；乳酸呈酸性，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，形成透明圈，故在配制培養(yǎng)基時(shí)加入碳酸鈣就能鑒別乳酸菌菌落；分解尿素的細(xì)菌在添加酚紅的指示劑的培養(yǎng)基上會(huì)顯示出特定的顏色；在鑒定大腸桿菌時(shí)在培養(yǎng)基中加入伊紅-美藍(lán)，呈現(xiàn)黑色菌落的即為大腸桿菌；亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。純化后的菌可在-20℃長期保存時(shí)，應(yīng)采用甘油管藏的方法對菌種進(jìn)行長期保藏。

（3）統(tǒng)計(jì)出平板上的菌落數(shù)量后還需知道接種時(shí)所用樣液的體積，兩者相除才能求出密度；乙同學(xué)一個(gè)空白對照平板出現(xiàn)了12個(gè)菌落，空白培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落說明被污染需重新制作培養(yǎng)并計(jì)數(shù)，用來計(jì)數(shù)是不正確的。