Question

【題目】小麥、水稻等作物增產是長期使用化肥、農藥、植物生長調節(jié)劑等的結果，而使用氮肥增多，不僅導致作物品質下降，還會污染環(huán)境。把固氮微生物的固氮基因導入小麥、水稻等農作物細胞內，讓其自行固氮可解決此問題。回答下列問題：

（1）固氮菌有自生固氮菌（可自行固氮）和共生固氮菌（如和豆科植物形成根瘤后才能固氮的根瘤菌）。對土壤中的固氮微生物進行選擇通常用的是________（填“有機氮”“無機氮”或“不加氮”）源培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中培養(yǎng)的是_________（填“自生固氮菌”或“共生固氮菌”）。

（2）為篩選出自生固氮菌，需要在制備的培養(yǎng)基中添加的基本營養(yǎng)物質包括水、碳源和________，該培養(yǎng)基能篩選出目的菌株的原因是___________。

（3）為檢驗培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿滅菌是否合格，可采取的措施是__________。

（4）現(xiàn)將10mL的固氮菌培養(yǎng)液進行梯度稀釋，通常是梯度稀釋10倍，即取1mL接種到_________mL的培養(yǎng)液中。分別取0．1mL稀釋倍數(shù)為105的樣液接種到5個培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計菌落數(shù)分別為39、41、42、43、45，則1mL懸液中活菌數(shù)量為____個，上述過程采用的接種方法是____________。

Answer 1

【答案】不加氮 自生固氮菌 無機鹽 只有自生固氮微生物才能在無氮培養(yǎng)基上形成菌落，其他微生物不能生長 取含培養(yǎng)基的空白平板在適宜條件下培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基上是否形成菌落 9 4．2×107 稀釋涂布平板法

【解析】

進行系列稀釋操作的步驟是：取盛有9mL水的無菌試管6支，并按101~106的順序編號，用灼燒冷卻的移液管吸取1mL菌液注入編號為101試管中，并吹吸3次，使之混勻，從101倍液中吸取1mL菌液注入到編號為102試管內吹吸均勻，獲得102倍液，依此類推。

（1）對土壤中的固氮微生物進行選擇通常用的是不加氮源的選擇培養(yǎng)基，能在培養(yǎng)基上正常生長的就是有固氮能力的自生固氮菌。

（2）各種培養(yǎng)基的配方雖然不同，但一般含有水、碳源、氮源和無機鹽，因為該培養(yǎng)基為缺少氮源的選擇培養(yǎng)基，故還需要添加無機鹽；因為培養(yǎng)基中缺少氮源，所以只有自生固氮微生物才能在其上正常生長。

（3）為檢驗培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿滅菌是否合格，可取含培養(yǎng)基的空白平板在適宜條件下培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基上是否形成菌落，如果沒有菌落形成則說明合格。

（4）梯度稀釋10倍，即取1mL接種到9mL的培養(yǎng)液中，由題干可知5個培養(yǎng)基上菌落的平均數(shù)為42個，則1mL懸液中活菌數(shù)量為42×105×10=4.2×107個，進行菌落計數(shù)需用稀釋涂布平板法接種。