Question

【題目】某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過(guò)程如圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題．
（1）抗鹽某因是否在煙草細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是 ．
（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用和兩種酶對(duì)目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．含有目的基因的農(nóng)桿菌可根據(jù)標(biāo)記基因進(jìn)行篩選．若農(nóng)桿菌在含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上都可以生長(zhǎng)繁殖，農(nóng)桿菌中是否己含有目的基因？（是/否）．為什么？ ．
（4）愈傷組織經(jīng)形成完整植株，這一過(guò)程需要再轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，該過(guò)程的實(shí)質(zhì)是 ．

Answer 1

【答案】
（1）抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上
（2）HindⅢ； SalⅠ
（3）否；含有目的基因的質(zhì)�？顾沫h(huán)素的基因被破壞
（4）再分化；分化；基因的選擇性表達(dá)
【解析】解：（1）抗鹽某因是否在煙草細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上．（2）質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點(diǎn)，其中BamHI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會(huì)破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會(huì)導(dǎo)致目的基因與運(yùn)載體反向連接；因此在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalI和HindIII兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒和含有抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，抗四環(huán)素基因被破壞，但抗氨芐青霉素的基因沒(méi)有被破壞，因此含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生存，但在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存．（4）植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分化兩個(gè)階段，脫分化形成的愈傷組織需經(jīng)再分化形成完整植株，這一過(guò)程需要再轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)．

所以答案是：（1）抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上（2）HindⅢSalⅠ（3）否 含有目的基因的質(zhì)�？顾沫h(huán)素的基因被破壞（4）再分化 分化 基因的選擇性表達(dá)

【考點(diǎn)精析】利用基因工程的原理及技術(shù)對(duì)題目進(jìn)行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．