Question

賴氨酸是人體必需氨基酸之一，可促進人體發(fā)育、增強免疫力．乙圖為賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆牛的培育流程，其中字母表示相應的操作過程．請回答：

（1）構(gòu)建基因表達載體的過程如甲圖所示，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ為四種限制酶，該過程中所使用的限制酶是

 

和

 

，除限制酶外，該過程還需要的工具酶有

 

．基因表達載體除圖示結(jié)構(gòu)外，還應含有

 

和

 

終止子等結(jié)構(gòu)．
（2）為了獲得較多的卵母細胞需要對供體注射

 

，卵母細胞要培養(yǎng)至

 

時期，才具備受精能力．
（3）胚胎成纖維細胞在培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)

 

和

 

現(xiàn)象，分瓶時需用

 

  處理以得到細胞懸液，進而進行

 

培養(yǎng)使細胞增殖．
（4）圖乙中a、b過程利用的主要生物技術(shù)有

 

和

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù),動物細胞與組織培養(yǎng)過程

專題：

分析：1）分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中SmaⅠ酶的切割位點位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點．所以要活動重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進行切割．
2）卵母細胞的采集主要方法是：用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵，然后，從輸卵管中沖取卵子，直接與獲能的精子體外受精．還可以從已屠宰母畜的卵巢中采集卵母細胞，或者直接從活體動物的卵巢中吸取卵母細胞，叫活體采卵．采集的卵母細胞，都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期后，才能與獲能的精子受精．
3）動物體細胞核移植的過程：如高產(chǎn)奶牛（提供體細胞）進行細胞培養(yǎng)；同時采集卵母細胞，在體外培養(yǎng)到減二分裂中期的卵母細胞，去核（顯微操作）；將供體細胞注入去核卵母細胞；通過電刺激使兩細胞融合，供體核進入受體卵母細胞，構(gòu)建重組胚胎；將胚胎移入受體（代孕）母牛體內(nèi)；生出與供體奶牛遺傳基因相同的犢牛．

解答： 解：（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，但限制酶SmaⅠ的切割位點位于抗病基因上，對SmaⅠ位點進行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ對圖中對應的位點進行切割．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，應選用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割質(zhì)粒．重組質(zhì)粒時，還需要DNA連接酶連接目的基因和質(zhì)粒切口．基因表達載體包括目的基因+啟動子+終止子+標記基因+復制原點．（2）卵母細胞的采集主要方法是：用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵．采集的卵母細胞，需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期后，才能與獲能的精子受精．
（3）動物細胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→培養(yǎng)時，懸液中的細胞會很快貼附在瓶壁上，細胞表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
（4）圖乙中a過程利用DNA拼接技術(shù)（基因工程）獲取含有目的基因的胚胎成纖維細胞，b過程是通過動物細胞核移植技術(shù)培養(yǎng)克隆動物．
故答案為：
（1）PstI；EcoRI（位置可顛倒）；DNA連接酶；啟動子；
（2）促性腺激素；減數(shù)第二次分裂中期；
（3）接觸抑制；貼壁生長（兩者順序可顛倒）；胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）；傳代；
（4）DNA拼接技術(shù)（基因工程）；動物細胞核移植技術(shù)．

點評：本題結(jié)合賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆牛培育過程圖，考查基因工程和動物細胞工程技術(shù)的相關(guān)知識，意在考查考生的識圖能力和理解所學知識要點的能力；能運用所學知識與觀點，對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論．