Question

(本題16分)下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題：

（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma Ⅰ切割前后，分別含有____ 、____個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越_______________。

（3）要用圖1中的質(zhì)粒和圖2中外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用Sma Ⅰ切割,原因是 。

（4）與只使用EcoR Ⅰ相比較，使BamH Ⅰ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止___________________________ __。

（5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入________酶。

（6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了____________________________。

（7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在___________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)。

Answer 1

（1）0、2 （2）高 （3）SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因

（4）質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化 （5）DNA連接

（6）鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞 （7）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)

【解析】

試題分析：（1）由圖可知質(zhì)粒分子是環(huán)狀的DNA分子，在切割前沒有游離的磷酸基團(tuán)故是0個(gè)，經(jīng)酶切割后成為一個(gè)鏈狀的DNA，會(huì)有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，由圖可知SmaI的酶切位點(diǎn)中GC含量多，，它們之間有3個(gè)氫鍵，插入的Sma Ⅰ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高。

（3）由圖可知在目的基因的中間有SmaI的酶切位點(diǎn)，如果用該酶酶切會(huì)破壞外源DNA中的目的基因。另外質(zhì)粒中的SmaI基因位于質(zhì)粒的抗性基因中，也會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因。

（4）用兩種酶切割質(zhì)粒和目的基因，因?yàn)閲?yán)格遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，兩種酶切產(chǎn)生的粘性末端不同，可防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化。

（5）將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合后需要加入DNA連接酶，能促進(jìn)它們的鏈接。

（6）重組質(zhì)粒中的抗性基因是為了鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞。即可以涂在相關(guān)抗生素的培養(yǎng)基上，能長出來的可初步確定是想要的目的菌株。

（7）因?yàn)橐�獲取具有吸收蔗糖能力的菌株，所以應(yīng)將構(gòu)建好的放在以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上，如果能長出菌落，說明基因?qū)�入成功�?/p>

考點(diǎn)：本題考查基因工程相關(guān)知識(shí)，意在考察考生對(duì)知識(shí)點(diǎn)的識(shí)記理解掌握程度和理解能力。