Question

【題目】艾滋�。�AIDS）是一種危害性極大的傳染病，由感染艾滋病病毒（HIV）引起。早發(fā)現(xiàn)早治療能有效的延長患者的壽命，提高患者的生活質量，目前醫(yī)學上檢測HIV的方法主要有兩種：HIV核酸檢測、HIV抗體檢測�；卮鹣铝袉栴}：

（1）HIV侵染人體后，病毒RNA比抗體早出現(xiàn)約1~2周，可通過核酸檢測是否早期感染。通常是先提取疑似患者血清中的RNA通過逆轉錄得到__________，然后進行PCR擴增反應，此過程中使DNA解旋的方法是_____________。

（2）對擴增產(chǎn)物進行分析常采用特異性探針檢測，通常采用帶有標記的DNA________（填“單鏈”或“雙鏈”）作為探針。探針與（1）中得到的核酸雜交，若觀察到____________顯示結果為陽性，則表明疑似患者體內(nèi)有HIV。

（3）1~2周后，用抗體檢測方法更能確診是否感染。使用該方法的前提是制備能檢測抗體的物質，一般采用基因工程方法，先獲得HIV的特異基因，構建表達載體，其組成包括目的基因、啟動子、終止子以及_______等，表達載體作用是____________。

（4）再將表達載體導入受體細胞，從受體細胞中分離得到HIV特異基因表達的蛋白質，可作為_________（填“抗原”或“抗體”）用于檢測疑似患者血清。

Answer 1

【答案】DNA 高溫 單鏈 雜交帶 標記基因 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。 抗原

【解析】

1、PCR的過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開。

2、基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；

（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術，個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）HIV侵染人體后，病毒RNA比抗體早出現(xiàn)約1~2周，可通過核酸檢測是否早期感染。通常是先提取疑似患者血清中的RNA通過逆轉錄得到DNA；然后進行PCR擴增反應，PCR擴增過程中高溫使DNA解旋。

（2）DNA分子雜交技術是將轉基因生物的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等做標記，以帶有標記的DNA的單鏈作為探針；探針與（1）中得到的核酸雜交，如果出現(xiàn)雜交帶，顯示結果為陽性，則表明疑似患者體內(nèi)有HIV。

（3）構建基因表達載體是基因工程成功的關鍵，其組成包括目的基因、啟動子、終止子以及標記基因等；表達載體作用是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。

（4）從受體細胞中分離得到HIV特異基因表達的蛋白質作為抗原用于檢測疑似患者血清是否存在HIV抗體。