Question

【題目】蛋白質的提取和分離在分子生物學研究中具有重要意義�；卮鹣铝信c蛋白質的提取和分離相關的問題：

（1）血紅蛋白提取和分離一般分為四步，即樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。

①樣品處理中紅細胞的洗滌要用_________反復沖洗、離心，在洗滌紅細胞時，離心速度過高和時間過長會使_________等一同沉淀，達不到分離的效果。洗滌干凈的標志是_________。

②在_________的作用下，洗滌好的紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白。

③粗分離過程中，透析的目的是_________。

（2）在洗脫過程中加入物質的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（pH為7．0）的目的是_________。

（3）在裝填色譜柱時不得有氣泡存在，因為_________。

Answer 1

【答案】生理鹽水 白細胞 離心后上清液中不再呈現(xiàn)黃色 蒸餾水和甲苯 去除樣品中分子量較小的雜質 準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)一致 氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果

【解析】

蛋白質的提取和分離一般分為四步：

（1）樣品處理：包括洗滌紅細胞；血紅蛋白稀釋；離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。

（2）粗分離：透析除去分子較小的雜質。

（3）純化：通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質蛋白質除去。

（4）純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。

凝膠色譜法是根據(jù)分子量的大小分離蛋白質的方法之一。

（1）樣品處理中紅細胞的洗滌要用生理鹽水反復沖洗、離心。洗滌紅細胞的目的是去除雜質蛋白。達到該目的的關鍵是控制離心的速度和時間。白細胞和淋巴細胞中不含有血紅蛋白，紅細胞的洗滌過程中，離心速度過高和時間過長會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，達不到分離的效果。洗滌干凈的標志是離心后上清液中不再呈現(xiàn)黃色。洗滌好的紅細胞在蒸餾水和甲苯的作用下破裂，釋放出血紅蛋白。透析的目的是去除樣品中分子量較小的雜質。

（2）在洗脫過程中加入物質的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（pH為7．0）的目的是準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)一致。

（3）在裝填色譜柱時不得有氣泡存在，因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果。