Question

【題目】重組人血小板生成素（rhTPO）是一種新發(fā)現(xiàn)的造血生長因子，下圖為通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)rhTPO的相關(guān)過程�；卮鹣铝袉栴}：

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)選用的限制酶是__________，原因是____________________。

（2）重組質(zhì)粒中的標(biāo)記基因是__________。通常采用__________技術(shù)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受精卵。早期胚胎培養(yǎng)到__________階段可以移植到代孕母羊體內(nèi)。

（3）目的基因探針__________（填“能”或“不能”）檢測轉(zhuǎn)基因母羊是否為純合子，理由是________。

（4）最終可以從羊乳汁中分離出血小板生成素（rhTPO）。檢測羊乳汁中是否含有人血小板生成素（rhTPO），常用___________________技術(shù)。

Answer 1

【答案】HindⅢ和XhoⅠ用HndⅢ和XhoⅠ可以得到完整的rhTPO基因（或用SmaⅠ切割會(huì)破壞rhTPO基因）抗卡那霉素基因顯微注射囊胚或桑椹胚不能無論轉(zhuǎn)基因母羊是純合子或雜合子，都能檢測到目的基因抗原一抗體雜交

【解析】

據(jù)圖示分析，圖中目的基因rhTPO上存在3個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，由于SmaⅠ的酶切位點(diǎn)位于目的基因的內(nèi)部，利用該酶切割會(huì)破壞目的基因，因此應(yīng)選擇HindⅢ和XhoⅠ兩種酶同時(shí)切割目的基因，而利用這兩種限制酶切割載體后會(huì)破壞質(zhì)粒上的抗四環(huán)素基因，因此應(yīng)選擇質(zhì)粒上的抗卡那霉素基因?yàn)闃?biāo)記基因。

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)選用的限制酶是HindⅢ和XhoⅠ，原因是SmaⅠ的酶切位點(diǎn)位于目的基因的中部，利用該酶切割會(huì)破壞目的基因。

（2）應(yīng)選擇質(zhì)粒上的抗卡那霉素基因?yàn)闃?biāo)記基因；將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受精卵常采用顯微注射法；一般待胚胎培養(yǎng)到囊胚或桑椹胚階段可進(jìn)行胚胎移植。

（3）無論轉(zhuǎn)基因母羊是純合子或雜合子，都能檢測到目的基因，因此目的基因探針不能用于檢測轉(zhuǎn)基因母羊是否為純合子。

（4）血小板生成素（rhTPO）本質(zhì)是蛋白質(zhì)，可利用抗原一抗體雜交進(jìn)行檢測。