Question

【題目】GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。請(qǐng)回答：

（1）完成圖中A過(guò)程必需的工具是 ；該基因治療的受體細(xì)胞為 。

（2）若要構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體，則需選擇圖中的 限制酶進(jìn)行酶切。

（3）如下圖表示四種質(zhì)粒，其中，箭頭所指部位為酶的識(shí)別位點(diǎn)，質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因。適于作為圖示GDNF基因運(yùn)載體的是 。

（4）下列有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶和質(zhì)粒運(yùn)載體的描述，錯(cuò)誤的是______（多選）

A．限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別DNA、切割DNA任一序列

B．限制性核酸內(nèi)切酶的作用部位與RNA聚合酶的完全相同

C．使用質(zhì)粒運(yùn)載體是為了避免目的基因被分解

D．質(zhì)粒運(yùn)載體可能是從細(xì)菌或者病毒的DNA改造的

（5）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種：?jiǎn)蝹�(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖所示，且載體大小為6000bp）。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切，若是正向連接的重組載體，其產(chǎn)生的酶切片段數(shù)為 個(gè)，反向連接的重組載體產(chǎn)生片段有 （多選）。

①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp

Answer 1

【答案】

（1）限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）和DNA連接酶 （大鼠）神經(jīng)干細(xì)胞

（2）XhoⅠ

（3）A

（4）ABD

（5）2 ②⑥

【解析】

試題分析：

（1）A過(guò)程表示目的基因的獲取與基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要用限制酶和DNA連接酶；研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。

（2）要構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體，應(yīng)用XhoⅠ限制酶，其可以保證目的基因完整。

（3）運(yùn)載體要有限制酶切割位點(diǎn)，保證目的基因能插入，同時(shí)不能破壞標(biāo)記基因，因此選A。

（4）限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別DNA，能識(shí)別特定的核苷酸序列，A錯(cuò)誤；限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別特定的核苷酸序列，而RNA聚合酶識(shí)別的是啟動(dòng)子，B錯(cuò)誤；質(zhì)粒是原核生物中除擬核之外的能獨(dú)立復(fù)制的DNA，病毒中沒(méi)有，D錯(cuò)誤。

（5）正向鏈接的表達(dá)載體上有HpaI酶和BamHI酶兩個(gè)切割位點(diǎn)，切割后形成兩個(gè)片段；質(zhì)粒和目的基因反向連接后的基因表達(dá)載體的大小為6700bp，HpaI酶和BamHI酶切割位點(diǎn)之間的長(zhǎng)度為200bp，則剩余片段大小為6500bp。