Question

【題目】紅細胞含有大量血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成的，血紅蛋白的主要功能是攜帶 O2 或 CO2。我們可以選用豬、牛、羊或其他哺乳動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白。根據(jù)材料回答下列問題：

(1)a、b 均為蛋白質(zhì)分子,其中先從層析柱中洗脫出來的是_________,原因是_________。

(2)若選用 Sephadex G—100,則 G 表示__________。

(3)紅細胞的洗滌過程中，離心速度過高和時間過長會使_________一同沉淀,達不到分離的效果。透析的原理是___________。

(4)有同學(xué)利用凝膠色譜法進行血紅蛋白的分離(圖一)，他在操作中加樣的正確順序是________。

(5)圖二、圖三分別是不同的兩位同學(xué)利用同一種樣品分離得到的結(jié)果，則圖三中與圖二中蛋白質(zhì) P對應(yīng)的是_________________。

Answer 1

【答案】a a 相對分子質(zhì)量大,無法進入凝膠內(nèi)部的通道,只能在凝膠外部移動,路程較短,移動速度較快 凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及分離范圍 白細胞和淋巴細胞 小分子可以自由通過透析袋(半透膜)，而大分子不能通過 ④①②③ 丙

【解析】

據(jù)圖可知，蛋白質(zhì)a的相對原子質(zhì)量大于b；瓊脂糖凝膠電泳過程中，蛋白質(zhì)由陰極向陽極運動，蛋白質(zhì)的移動速率與其所帶的電荷和相對分子質(zhì)量的大小有關(guān)。

(1)圖一代表凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)，大分子蛋白質(zhì)a不會進入凝膠內(nèi)部，在凝膠顆粒之間快速通過，路程較短,移動速度較快，最先先從層析柱中洗脫出來。

(2)Sephadex G—100中，G 表示凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及分離范圍，G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍。

(3) 白細胞和淋巴細胞中不含有血紅蛋白，紅細胞的洗滌過程中，離心速度過高和時間過長會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，達不到分離的效果。透析時小分子可以自由通過透析袋(半透膜)，而血紅蛋白不能通過，從而達到去除小分子蛋白質(zhì)的目的

(4) 加樣前，打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。用吸管小心地將1mL透析后的樣品加到色譜柱的頂端（圖5-22），注意不要破壞凝膠面。加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)。等樣品完全進入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。小心加入物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進行洗脫。順序為④①②③。

(5)瓊脂糖凝膠電泳過程中，在不考慮電荷差別的情況下，蛋白質(zhì)的遷移的速率決定于其相對分子質(zhì)量的大小，據(jù)圖二可知，蛋白質(zhì)P運動速度最快，說明其分子量最小，凝膠色譜分析過程中，分子量小的蛋白質(zhì)運動速度最慢，洗脫時間最長，則圖三中的丙與圖二中蛋白質(zhì) P對應(yīng)。