11.艾滋病病毒(HIV)外殼的包膜上有多種蛋白質(zhì),其中包膜糖蛋白(env)基因編碼gpl60蛋白,進一步加工成gpl20蛋白,具有較強的抗原性.制備抗HIV gpl20的單克隆抗體,為艾滋病的治療帶來希望.請回答下列問題:
(1)若利用動物細胞工程制備抗HIV gpl20的單克隆抗體,涉及到的技術(shù)手段主要有動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、動物細胞融合技術(shù).
(2)細胞融合常用的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒.融合后需要用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選,只有融合的雜種細胞才能生長,這種細胞的特點是既能大量繁殖,又能產(chǎn)生抗HIVgpl20抗體.
(3)若要大量制備該單克隆抗體,可將篩選出來的細胞進行體外培養(yǎng),在培養(yǎng)液中通入一定濃度的CO2,主要作用是維持培養(yǎng)液的pH.
(4)科研人員設(shè)想用基因工程制備能表達抗HIV pl20抗體的重組細胞,獲得目的基因可利用PCR技術(shù)擴增,需要在反應(yīng)體系中添加的有機物有引物和模板DNA、Taq酶和4種脫氧核苷酸.利用顯微注射法將目的基因?qū)牍撬枇黾毎蚬こ痰暮诵氖腔虮磉_載體的構(gòu)建.
分析 1、單克隆抗體的制備過程中利用了動物細胞融合技術(shù)和動物細胞培養(yǎng)技術(shù),在制備的過程中的兩次篩選考生必須識記,同時在進行雜交瘤細胞體外培養(yǎng)的過程需注意培養(yǎng)條件.
2、有關(guān)PCR技術(shù)的相關(guān)知識:
(1)概念:PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù).
(2)原理:DNA復(fù)制.
(3)前提條件:要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物.
(4)過程:①高溫變性:DNA解旋過程;②低溫復(fù)性:引物結(jié)合到互補鏈DNA上;③中溫延伸:合成子鏈.PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶,高溫條件下氫鍵可自動解開.
解答 解:(1)單克隆抗體的制備過程中,首先利用了動物細胞融合技術(shù)獲得雜交細胞,然后利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞.
(2)細胞融合常用的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒.融合后需要用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選,只有融合的雜交瘤細胞才能生長,該細胞的特點是既能大量繁殖,又能產(chǎn)生抗HIV gpl20抗體.
(3)若要大量制備該單克隆抗體,可將篩選出來的細胞進行體外培養(yǎng),在培養(yǎng)液中通入一定濃度的CO2,來維持培養(yǎng)液的pH.
(4)PCR技術(shù)擴增目的基因的過程中,需要在反應(yīng)體系中添加兩種引物和模板DNA、Taq酶和4種脫氧核苷酸.利用顯微注射法將目的基因?qū)牍撬枇黾毎蚬こ痰暮诵氖腔虮磉_載體的構(gòu)建.
故答案為:
(1)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、動物細胞融合技術(shù)
(2)滅活的病毒 雜種細胞 既能大量繁殖,又能產(chǎn)生抗HIV gpl20抗體
(3)維持培養(yǎng)液的pH
(4)引物和模板DNA 顯微注射 基因表達載體的構(gòu)建
點評 本題考查了單克隆抗體的制備以及基因工程的有關(guān)知識,要求考生能夠識記單克隆抗體的制備過程以及應(yīng)用的相關(guān)技術(shù),掌握PCR技術(shù)的原理和條件,識記基因工程的操作步驟等,再結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確答題.