Question

12．資料甲：某種細(xì)菌體內(nèi)有抗蟲基因，該基因能指導(dǎo)抗蟲毒蛋白的合成．我國科學(xué)家成功地將該抗蟲基因?qū)�入棉花�?xì)胞中，培育出了抗蟲效果好的棉花新品種．
資料乙：研究表明，抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達(dá)H蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長，科學(xué)家利用小鼠制備出了抗H蛋白的單克隆抗體．
請回答下列問題：
（1）資料甲中，獲取抗蟲基因時可使用EcoRI，其原因是含抗蟲基因的DNA片段中含有EcoRI能夠識別的特定的核苷酸序列．向棉花細(xì)胞導(dǎo)入抗蟲基因時，我國科學(xué)家采用了花粉管通道法．抗蟲基因?qū)�入棉花�?xì)胞后，為確定棉花植株是否具有抗蟲特性以及抗性的程度如何，需要做抗蟲的接種實驗進(jìn)行個體水平的鑒定．
（2）資料乙中，選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點，是因為H蛋白在成年個體的正常組織細(xì)胞中低表達(dá)（填“低表達(dá)”或“高表達(dá)”）．將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，從該小鼠的脾臟中獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，將其與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，細(xì)胞融合利用的原理是細(xì)胞膜具有流動性．與植物原生質(zhì)體融合過程相比，該融合過程特有的誘導(dǎo)方法是用滅活的病毒處理．在雜交瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中是否需要添加血清需要（填“需要”或“不需要”）；培養(yǎng)箱中充入5% CO₂的主要作是維持培養(yǎng)液（適宜）的pH．為避免培養(yǎng)過程中代謝產(chǎn)物對雜交瘤細(xì)胞的毒害，常采取的措施是定期更換培養(yǎng)液（基）．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）EcoRI為一種限制酶，能夠識別的特定的核苷酸序列（GAATTC）并在特定的位點上進(jìn)行切割，而含抗蟲基因的DNA片段中含有EcoRI的識別序列和切割位點，因此獲取抗蟲基因時可使用EcoRI．向棉花細(xì)胞導(dǎo)入抗蟲基因時，我國科學(xué)家采用了花粉管通道法．為確定棉花植株是否具有抗蟲特性以及抗性的程度如何，在個體水平上需進(jìn)行抗蟲的接種實驗．
（2）由題意“抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達(dá)H蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長”可推知：H蛋白在成年個體的正常組織細(xì)胞中低表達(dá)．動物細(xì)胞進(jìn)行融合的原理是細(xì)胞膜具有流動性，與植物原生質(zhì)體融合過程相比，該融合過程特有的誘導(dǎo)方法是用滅活的病毒處理．由于人們對動物細(xì)胞所需要的營養(yǎng)物質(zhì)沒有完全搞清楚，因此在雜交瘤細(xì)胞（動物細(xì)胞）的體外培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中需要添加血清、血漿等一些天然物質(zhì)．培養(yǎng)箱中充入5% CO₂的主要作是維持培養(yǎng)液（適宜）的pH．為避免培養(yǎng)過程中代謝產(chǎn)物對雜交瘤細(xì)胞的毒害，常采取的措施是定期更換培養(yǎng)液．
故答案為：
（1）EcoRI能夠識別的特定的核苷酸序列     花粉管通道    抗蟲的接種
（2）低表達(dá)     細(xì)胞膜具有流動性      用滅活的病毒處理      需要    維持培養(yǎng)液（適宜）的pH
定期更換培養(yǎng)液（基）

點評 本題考查了基因工程及動物細(xì)胞融合在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟等，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確解答．