Question

家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng),可提取干擾素用于制藥。

(1)進行轉(zhuǎn)基因操作前,需用 酶短時處理幼蠶組織,以便獲得單個細(xì)胞。

(2)為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá),需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的 和 之間。

(3)采用PCR技術(shù)可驗證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含:擴增緩沖液(含Mg2+)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、 和 。

(4)利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時,貼壁生長的細(xì)胞會產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中,這樣可以 增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量,也有利于空氣交換。

 

Answer 1

(1)胰蛋白(或膠原蛋白) (2)啟動子 終止子

(3)對干擾素基因特異的DNA引物 Taq DNA聚合酶 (4)擴大細(xì)胞貼壁生長的附著面積

【解析】(1)利用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動物組織可獲得單個細(xì)胞。(2)來自cDNA文庫中的目的基因不含復(fù)制原點、標(biāo)記基因、啟動子和終止子等,故需將該目的基因插入到啟動子和終止子之間。(3)PCR技術(shù)是在體外高溫條件下進行的,需利用熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)。由于DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸連接在一個片段上,所以在PCR反應(yīng)體系中還需加入引物。(4)據(jù)題意可知,反應(yīng)器中放入多孔中空薄壁小玻璃珠可擴大細(xì)胞貼壁生長的附著面積,有利于細(xì)胞增殖。