Question

9．如圖是將乙肝表面抗原基因轉(zhuǎn)移到煙草細(xì)胞內(nèi)生產(chǎn)乙肝疫苗的示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題．

（1）過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建．為了使目的基因正常表達(dá)，其首端必須有啟動(dòng)子，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位．若限制酶切出了平末端，要選擇T₄DNA連接酶進(jìn)行連接．（填“E•coliDNA連接酶”或“T₄DNA連接酶”）
（2）圖中將乙肝表面抗原基因?qū)�入煙草�?xì)胞的方法稱為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．它是利用運(yùn)載體Ti質(zhì)粒中含有T-DNA序列，可以將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體上．
（3）圖中將乙肝表面抗原基因?qū)�入煙草�?xì)胞后，長(zhǎng)芽、生根的過(guò)程中采用了細(xì)胞工程的植物組織培養(yǎng)植物技術(shù)，該技術(shù)的原理是細(xì)胞具有全能性．
（4）檢測(cè)煙草植株細(xì)胞中乙肝表面抗原基因是否合成出乙肝表面抗原蛋白，采用的方法是抗原一抗體雜交法．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：
①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；
②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；
③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
圖示中①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建，②為目的基因的導(dǎo)入過(guò)程．

解答 解：（1）據(jù)圖示可知，過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，RNA聚合酶與其結(jié)合后可以驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄．為了使目的基因正常表達(dá)，其首端必須有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，即啟動(dòng)子，若限制酶切出了平末端，要選擇T₄DNA連接酶進(jìn)行連接．
（2）將目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，故將乙肝表面抗原基因?qū)�入煙草�?xì)胞的方法稱為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．它是利用運(yùn)載體Ti質(zhì)粒中含有T-DNA序列，可以將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體上．
（3）圖中將乙肝表面抗原基因?qū)�入煙草�?xì)胞后，需要采用了細(xì)胞工程的植物組織培養(yǎng)技術(shù)讓其生根、長(zhǎng)芽，該技術(shù)的原理是植物細(xì)胞具有全能性．
（4）檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否翻譯出乙肝抗原蛋白，檢測(cè)的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建    RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合T₄DNA連接酶
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法       T-DNA
（3）植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞具有全能性
（4）抗原一抗體雜交法

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生掌握基因工程中目的基因檢測(cè)與鑒定的方法，能夠根據(jù)題意判斷個(gè)步驟的名稱和操作，難度中等．