Question

19．我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)的種豬場(chǎng)自然分娩產(chǎn)出，這標(biāo)志著我國在轉(zhuǎn)基因克隆豬技術(shù)領(lǐng)域已達(dá)到世界領(lǐng)先水平．如圖為我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）該過程使用質(zhì)粒的目的是作為運(yùn)載體，與目的基因形成基因表達(dá)載體，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)，并進(jìn)行自我復(fù)制．
（2）圖中通過過程①②形成重組質(zhì)粒，需要限制酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-↓GATC-．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來可以，理由是：因?yàn)樾纬傻酿ば阅┒耸窍嗤�的（或是可以互補(bǔ)的）．
（3）圖示工程中，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞常用的方法是顯微注射技術(shù)．然后還要通過DNA分子雜交技術(shù)來檢測(cè)綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上．
（4）圖示中，將所采集到的卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)到減數(shù)分裂第二次分裂中期（M II中期）期即可通過顯微操作將其細(xì)胞核去除并形成重組細(xì)胞，用物理或化學(xué)方法進(jìn)行激活，然后再通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）技術(shù)培養(yǎng)成早期胚胎．
（5）過程⑧的實(shí)質(zhì)是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移．

Answer 1

分析 據(jù)圖分析，①表示獲取綠色熒光蛋白基因，②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，④表示取供體細(xì)胞的細(xì)胞核，⑤去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核，⑥表示核移植，⑦表示早期胚胎的培養(yǎng)，⑧表示胚胎移植．

解答 解：（1）基因工程中，利用質(zhì)粒作為運(yùn)載體，與目的基因形成基因表達(dá)載體，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)，并進(jìn)行自我復(fù)制．
（2）酶Ⅰ和酶Ⅱ識(shí)別序列不同，但切割后產(chǎn)生的黏性末端的末端序列相同，因此在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端可以連接．
（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，采用最多也最有效的方法是顯微注射法．然后還要通過DNA分子雜交技術(shù)來檢測(cè)綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上．
（4）圖示中，將所采集到的卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)到減數(shù)分裂第二次分裂中期（M II中期）期即可通過顯微操作將其細(xì)胞核去除并形成重組細(xì)胞，用物理或化學(xué)方法進(jìn)行激活，然后再通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）技術(shù)培養(yǎng)成早期胚胎．
（5）過程⑧表示胚胎移植，該技術(shù)的實(shí)質(zhì)是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移．
故答案為：
（1）作為運(yùn)載體，與目的基因形成基因表達(dá)載體，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)，并進(jìn)行自我復(fù)制
（2）可以　因?yàn)樾纬傻酿ば阅┒耸窍嗤�的（或是可以互補(bǔ)的）
（3）顯微注射技術(shù)    DNA分子雜交
（4）減數(shù)分裂第二次分裂中期（M II中期）      動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）
（5）早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的含義，再結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．