Question

如圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖作答．

（1）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生

 

末端．過程②必需的酶是

 

酶，過程③必需的酶是

 

酶．
（2）在利用AB獲得C的過程中，必須用

 

切割A(yù)和B，使它們產(chǎn)生相同的粘性末端，再加入

 

，才可形成C．利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是

 

．
（3）為使過程⑧更易進(jìn)行，可用

 

（藥劑）處理D．
（4）為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為

 

．為了檢測(cè)胰島素基因請(qǐng)轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成

 

，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（5）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌傳話法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的

 

中，然后通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化作用將目的基因插入植物細(xì)胞的

 

上．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)胰島素的操作過程示意圖．圖中①表示從胰島B細(xì)胞中獲取胰島素mRNA的過程；②為逆轉(zhuǎn)錄過程，A為胰島素基因；③④⑤表示目的基因的擴(kuò)增過程；⑥表示用限制酶切割運(yùn)載體形成黏性末端的過程；⑦表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；⑧表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程；⑨表示目的基因隨著受體細(xì)胞的增殖和擴(kuò)增；⑩是從培養(yǎng)液中獲取胰島素的過程．

解答： 解：（1）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生平末端．過程②逆轉(zhuǎn)錄必需的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，過程③DNA雙鏈打開必需的酶是解旋酶．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程中，必須用相同的限制酶切割A(yù)（含目的基因的外源DNA分子）和B（運(yùn)載體）以產(chǎn)生相同的黏性末端，再加入DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成C（重組DNA分子）．利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄．
（3）⑧是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程，當(dāng)受體細(xì)胞是微生物細(xì)胞時(shí)，常采用感受態(tài)細(xì)胞法，即用CaCl₂處理微生物細(xì)胞使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞，從而將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．
（4）為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為DNA分子雜交技術(shù)．為了檢測(cè)胰島素基因請(qǐng)轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（5）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌傳話法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，然后通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化作用將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體DNA上．
故答案為：
（1）平        逆轉(zhuǎn)錄       解旋
（2）同一種限制性內(nèi)切酶       DNA連接酶       RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄
（3）CaCl₂ 
（4）DNA分子雜交技術(shù)　   　蛋白質(zhì)
（5）T-DNA　    染色體DNA

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)胰島素的操作過程示意圖，考查基因工程等相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程或物質(zhì)的名稱，運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)答題，難度適中．