Question

8．某研究組開展了將白細(xì)胞介素-2基因轉(zhuǎn)入某動物細(xì)胞，并對該動物細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，提取白細(xì)胞介素-2用于制藥的研究．請回答下列問題：
（1）為使干擾素基因在某動物細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動子和終止子之間．將白細(xì)胞介素-2基因?qū)�入動物�?xì)胞中常用顯微注射法，轉(zhuǎn)基因成功的標(biāo)志是細(xì)胞中有白細(xì)胞介素-2生成．
（2）獲得轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞后，將轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞放入二氧化碳（或CO₂）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，為了防止培養(yǎng)過程中雜菌污染，可向培養(yǎng)基中加入抗生素．培養(yǎng)時細(xì)胞會有貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象，若細(xì)胞數(shù)目過多會因細(xì)胞密度過大和代謝消耗引起營養(yǎng)枯竭而不能生長，此時需進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)時需用胰蛋白酶處理后再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)液中．
（3）若白細(xì)胞介素-2不能分泌到細(xì)胞外，需對鈿胞進(jìn)行破碎處理，再提取獲得白細(xì)胞介素-2．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：（1）基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個過程，其中轉(zhuǎn)錄過程的開始需要啟動子控制，結(jié)束需要終止子控制．因此，為使干擾素基因在某動物細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動子和終止子之間．將目的基因（白細(xì)胞介素-2基因）導(dǎo)入動物細(xì)胞中常用顯微注射法．轉(zhuǎn)基因成功的標(biāo)志是目的基因成功表達(dá)，即細(xì)胞中有白細(xì)胞介素-2生成．
（2）獲得轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞后，將轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞放入二氧化碳（或CO₂）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，為了防止培養(yǎng)過程中雜菌污染，可向培養(yǎng)基中加入抗生素．培養(yǎng)時細(xì)胞會有貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象，若細(xì)胞數(shù)目過多會因細(xì)胞密度過大和代謝消耗引起營養(yǎng)枯竭而不能生長，此時需進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)時需用胰蛋白酶處理后再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)液中．
（3）若白細(xì)胞介素-2不能分泌到細(xì)胞外，需對鈿胞進(jìn)行破碎處理，再提取獲得白細(xì)胞介素-2．
故答案為：
（1）啟動子   終止子    顯微注射   白細(xì)胞介素-2
（2）二氧化碳（或CO₂）   抗生素    接觸抑制     胰蛋白酶 
（3）破碎

點評 本題考查基因工程和動物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．