Question

【題目】對蛋白質的研究與應用，需要從復雜的細胞混合物中提取、分離高純度的蛋白質。請回答以下關于血紅蛋白的提取和分離的問題：

（1）實驗材料選用哺乳動物的血液比雞血更好，理由是___________。為防止血液凝固，在采血器中要預先加入___________。

（2）血液樣品離心后，從上往下數(shù)的第___________層是血紅蛋白的水溶液，是___________色透明液體。透析時使用緩沖液的目的是_________________________________。

（3）在裝填凝膠柱時，不得有氣泡存在的原因是_________________________________�？梢栽谀�膠柱中加入大分子的有色物質，觀察色帶移動的情況，如果______________________，說明凝膠色譜柱的性能良好。

（4）判斷純化的蛋白質是否達到要求，最常用的是______________________法鑒定。

Answer 1

【答案】哺乳動物成熟的紅細胞沒有眾多的細胞器和細胞核，血紅蛋白含量高且含雜蛋白少 檸檬酸鈉 3 紅色 維持穩(wěn)定的pH值，保證血紅蛋白結構和功能不變 氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果 紅色區(qū)帶均勻一致地移動 聚丙烯酰胺凝膠電泳

【解析】

血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經過透析去除分子量較小的雜質，即樣品的粗分離；然后通過凝膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去，即樣品的純化；最后經聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定。

（1）哺乳動物成熟的紅細胞沒有各種細胞器和細胞核，血紅蛋白的含量較高且提純時雜蛋白少。檸檬酸鈉稱為抗凝劑，可以防止血液凝固。

（2）分離血紅蛋白溶液：試管中的溶液分為4層：第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質的沉淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質的暗紅色沉淀物。因此血紅蛋白混合液在離心管中離心后，從上往下數(shù)第3層是紅色透析液體即為血紅蛋白的水溶液。透析時使用緩沖液的目的是維持穩(wěn)定的pH值，維持血紅蛋白結構和功能不變。

（3）裝填凝膠色譜柱時，要注意色譜柱內不能有氣泡在，這是因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果。在凝膠柱中加入大分子的有色物質，觀察色帶的移動情況，如果色譜柱中紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明凝膠色譜柱的性能良好。。

（4）判斷純化的蛋白質是否達到要求，可用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定，電泳是指帶電離子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。