Question

1．科研人員通過基因工程實(shí)現(xiàn)了β-甘露聚糖酶基因在豬腸道野生酵母菌中的表達(dá)，使原來不能被豬利用的粗纖維在豬腸道內(nèi)被分解成可直接吸收的單糖．圖為構(gòu)建工程菌的部分過程，其中介導(dǎo)序列能引導(dǎo)載體整合到酵母菌的染色體DNA上．請結(jié)合相關(guān)知識，回答下列問題：

（1）利用PCR技術(shù)從野生酵母菌染色體DNA中獲取目的基因的前提是利用一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物．
（2）如表為四種限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)，用表中四種限制酶切割DNA，能得到相同的黏性末端的是限制酶BamHⅠ和BglⅡ．

限制酶	識別序列和切割位點(diǎn)
EcoR I	↓ GAATTC
BamH I	↓ GGATCC
BglⅡ	↓ AGATCT
Sal I	↓ GTCGAC

（3）在構(gòu)建介導(dǎo)序列質(zhì)粒載體時(shí)，選用EcoR I和BamH I同時(shí)切割質(zhì)粒和介導(dǎo)序列的目的是避免質(zhì)粒和介導(dǎo)序列發(fā)生自身環(huán)化．
（4）在構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，引入啟動(dòng)子的目的是驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（5）對重組表達(dá)載體進(jìn)行酶切鑒定，假設(shè)所用的酶均可將識別位點(diǎn)完全切開．若使用EcoR I和Sal I酶切，將得到3種DNA片斷．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：圖示為構(gòu)建工程菌的部分過程，其中①表示采用PCR技術(shù)擴(kuò)增介導(dǎo)序列的過程；②是用DNA連接酶將質(zhì)粒載體與介導(dǎo)序列連接形成重組質(zhì)粒的過程；③表示用DNA連接酶將質(zhì)粒載體、介導(dǎo)序列質(zhì)粒載體和克隆載體重新組成形成重組表達(dá)載體．

解答 解：（1）利用PCR技術(shù)從野生酵母菌染色體DNA中獲取目的基因的前提是利用一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物．
（2）表中限制酶BamHⅠ和BglⅡ的識別序列不同，但兩者切割產(chǎn)生的黏性末端相同，都是GATC．
（3）在構(gòu)建介導(dǎo)序列質(zhì)粒載體時(shí)，選用EcoRⅠ和BamHⅠ切割質(zhì)粒和介導(dǎo)序列得到的DNA兩端的黏性末端不同，可防止質(zhì)粒與質(zhì)粒、介導(dǎo)序列與介導(dǎo)序列之間進(jìn)行連接，從而避免質(zhì)粒和介導(dǎo)序列發(fā)生自身環(huán)化．
（4）啟動(dòng)子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（5）由圖可知，重組的基因表達(dá)載體含有2個(gè)EcoRⅠ酶割位點(diǎn)，含有1個(gè)SalⅠ酶切位點(diǎn)，因此使用EcoRⅠ和SalⅠ酶切重組質(zhì)粒可以得到3種DNA片斷．
故答案為：
（1）引物  
（2）BamHⅠ和BglⅡ
（3）避免質(zhì)粒和介導(dǎo)序列發(fā)生自身環(huán)化
（4）驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA  
（5）3

點(diǎn)評 本題結(jié)合構(gòu)建工程菌的部分過程圖解，考查基因工程的技術(shù)和原理，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能根據(jù)圖中和表中信息答題．需要注意的是第（5）題，考生可以將重組表達(dá)載體上的酶切位點(diǎn)標(biāo)出，明確BamHⅠ和BglⅡ切割后的黏性末端能在DNA連接酶的作用下連接起來，但重組序列不能被BamHⅠ或BglⅡ酶割．