Question

19．胰島B細胞移植是一種有效治療糖尿病的方法．利用小鼠再生胰腺提取物（RPE）可定向誘導人
羊膜間充質干細胞（hAMSCs）分化成胰島B細胞．回答問題：
（1）取人羊膜組織刮除血塊的上皮細胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶處理，最終制成hAMSCs懸液，將細胞懸液放入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)，當細胞帖壁生長到一定階段時，出現接觸抑制現象，此時細胞停止分裂增殖，這時需要將細胞進行相關處理，然后進行傳代培養(yǎng)．
（2）取傳至第3帶的hAMSCs放入細胞培養(yǎng)板，同時加入RPE進行誘導分化培養(yǎng)．該代hAMSCs能保持細胞正常的核型．誘導分化培養(yǎng)15天后，提取細胞mRNA，用胰島素基因探針進行分子雜交，可初步檢測hAMSCs是否分化成胰島B細胞．
（3）hAMSCs細胞在RPE作用下，可以定向分化形成具有正常胰島B細胞功能的細胞，其根本原因是基因選擇性表達．培養(yǎng)hAMSCs細胞的培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分包括糖、氨基酸、無機鹽、血清（至少寫兩種）
（4）人體器官移植面臨的主要問題有供體器官短缺和免疫排斥，目前臨床通過使用免疫抑制劑抑制T細胞的增殖來提高器官移植的成活率．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
2、胚胎干細胞的主要用途是：
①可用于研究哺乳動物個體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律；
②是在體外條件下研究細胞分化的理想材料．ES細胞在飼養(yǎng)層細胞上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中，能夠維持不分化的狀態(tài)．在培養(yǎng)液中加入分化誘導因子，如牛黃酸、丁酰環(huán)腺苷酸等化學物質時，就可以誘導ES細胞向分化，這為揭示細胞分化和細胞凋亡機理提供了有效的手段；
③可以用于治療人類的某些頑疾，如帕金森綜合癥、糖尿病、老年癡呆癥、肝衰竭、新衰竭、成骨不良；
④培育各種組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題．

解答 解：（1）取人羊膜組織刮除血塊、上皮細胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理，最終制成hAMSCs懸液．將細胞懸液放人培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)，當細胞貼壁生長到一定階段時，出現接觸抑制現象，此時細胞停止分裂增殖，這時需要將細胞進行相關處理，然后進行傳代培養(yǎng)．
（2）10代以內的細胞可以保持正常的二倍體核型，因此傳至第 3 代的hAMSCs能保持細正常的（二倍體）核型．細胞分化的實質是基因的選擇性表達，因此要檢測 hAMSCs 是否分化成胰島 B 細胞，在誘導分化培養(yǎng)15天后，可提取細胞的RNA（或mRNA），用胰島素基因探針進行分子雜交．
（3）hAMSCs細胞在RPE作用下，可以定向分化形成具有正常胰島B細胞功能的細胞，其根本原因是基因選擇性表達．培養(yǎng)hAMSCs細胞的培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分包括糖、氨基酸、無機鹽、血清．
（4）人體器官移植面臨的主要問題有供體器官短缺和免疫排斥，目前臨床通過使用免疫抑制劑抑制T細胞的增殖來提高器官移植的成活率．
故答案為：
（1）胰蛋白酶      接觸抑制
（2）核型     mRNA
（3）基因選擇性表達        糖、氨基酸、無機鹽、血清
（4）免疫抑制劑

點評 本題考查動物細胞培養(yǎng)、胚胎干細胞的研究與應用等知識，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯系，形成知識網絡結構的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力，屬于考綱識記和理解層次的考查．