Question

【題目】重金屬嗜好性細(xì)菌在飲用水微污染和應(yīng)急突發(fā)事件中能夠用于水污染控制處理。獲得高純度、安全、高嗜好重金屬的細(xì)菌，需要進(jìn)行系列獲取樣本及其相關(guān)培養(yǎng)的實驗。實驗室選用鉛、汞作為重金屬實驗劑。

（1）為了較快取得高嗜好重金屬的細(xì)菌樣本，一般選擇_______________的土壤浸出液。

要提純理想的菌種樣本，研究小組將實驗分兩步，第一步是培養(yǎng)與提純高嗜好重金屬的細(xì)菌；由于這種細(xì)菌是用于飲用水的抗重金屬污染，因此，第二步必須進(jìn)行抗生素敏感性檢測。

完成下列有關(guān)“培養(yǎng)、獲取高純度、高嗜好重金屬細(xì)菌”的實驗設(shè)計思路：

Ⅰ配制培養(yǎng)基：

（2）分別配制含____________不同濃度系列的_______態(tài)培養(yǎng)基。

Ⅱ 滅菌：

（3）采用高溫、高壓滅菌。高溫高壓滅菌有利于殺死________________

Ⅲ制備培養(yǎng)平板（培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基）；

Ⅳ菌種分離與培養(yǎng)：

（4）接種：___________________________________________________________

然后在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)。

V菌種選擇：

（5）選取________________________菌種備用。

選取安全性菌種的實驗，一般采取抗生素敏感性實驗法：

（6）對抗生素敏感性越強(qiáng)的細(xì)菌安全性越高，其判斷理由是_______________________。

（7）用添加抗生素來篩選對抗生素高敏感的細(xì)菌，會由于這些細(xì)菌死亡而無法得到，試驗時為準(zhǔn)確定位和獲取對抗生素高敏感的細(xì)菌，必須配制__________________培養(yǎng)基，在實驗操作上，可采取先___________________________，然后通過“印章”法來接種到添加抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以準(zhǔn)確定位和獲得理想的菌群。

Answer 1

【答案】受金屬污染或重金屬含量高 汞、鉛 固 細(xì)菌與芽孢 高濃度重金屬培養(yǎng)基中的大菌落 用接種針取一定量的菌樣，采取分區(qū)劃線法接種在培養(yǎng)基上 對抗生素敏感度越高，細(xì)菌越容易被抗生素滅活，有利于保護(hù)人體健康 不含抗生素的對照 在對照培養(yǎng)基中進(jìn)行接種、培養(yǎng)

【解析】

實驗中要注意無菌操作，避免雜菌的污染，應(yīng)選用選擇培養(yǎng)基分離得到。

1、實驗室常用的滅菌方法：

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達(dá)到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min。

2、培養(yǎng)基配制時的注意事項：

①全程要求無菌操作，無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效地避免操作者自身被微生物感染。

②培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板．可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，當(dāng)感覺到錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板．操作時應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過火焰，以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

③平板冷凝后皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，若將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

④在倒平板的過程中，不能將培養(yǎng)基濺到皿蓋與皿底之間的部位，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。

（1）為了得到重金屬嗜好性細(xì)菌，一般選擇受金屬污染或重金屬含量高的土壤浸出液。

（2）應(yīng)選用選擇培養(yǎng)基分離、提純理想的菌種樣本．需要分別配制含汞、鉛不同濃度系列的固態(tài)培養(yǎng)基。

（3）在此實驗中要注意無菌操作，避免雜菌的污染，采用高溫、高壓滅菌．高溫高壓滅菌有利于殺死細(xì)菌與芽孢。

（4）可采用平板劃線法接種：用接種針取一定量的菌樣，采取分區(qū)劃線法接種在培養(yǎng)基上然后在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)。

（5）選擇培養(yǎng)基分離并選取高濃度重金屬培養(yǎng)基中的大菌落菌種備用。

（6）由于對抗生素敏感度越高，細(xì)菌越容易被抗生素滅活，有利于保護(hù)人體健康，因此對抗生素敏感性越強(qiáng)的細(xì)菌安全性越高。

（7）用添加抗生素來篩選對抗生素高敏感的細(xì)菌，試驗時為準(zhǔn)確定位和獲取對抗生素高敏感的細(xì)菌，需要配制不含抗生素的對照培養(yǎng)基，在實驗操作上，可采取先在對照培養(yǎng)基中進(jìn)行接種、培養(yǎng)，然后通過“印章”法來接種到添加抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以準(zhǔn)確定位和獲得理想的菌群。