Question

【題目】牛奶是微生物生長的良好培養(yǎng)基。牛奶在飲用前都要經(jīng)過巴氏消毒，以殺死有害微生物。為檢測自制酸奶是否被雜菌污染，進(jìn)行如圖所示操作。請回答下列問題。

（1）牛奶用巴氏消毒的好處是_________。

（2）圖中所用培養(yǎng)基在滅菌過程中，需用到高壓蒸汽滅菌鍋。下面是關(guān)于高壓蒸汽滅菌鍋使用過程中的操作，正確的先后順序是①②_________⑨。(有的操作可以重復(fù))

①裝入待滅菌物品 ②加蓋 ③加熱滅菌鍋④打開排氣閥 ⑤關(guān)閉排氣閥 ⑥切斷電源⑦壓力表的壓力降到零 ⑧打開蓋子 ⑨取出滅菌物品

（3）取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的工具是下圖中_________。

（4）圖中所示方法為稀釋涂布培養(yǎng)法，理想情況下，培養(yǎng)一段時間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為65個、63個、64個，則可以推測酸奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為_________個，運用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實際值_________ (偏大/偏小)，如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)_________的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染。

（5）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，要進(jìn)一步分離純化乳酸菌采用下圖所示的劃線分離操作，正確的是_________，其正確操作過程中，培養(yǎng)基在劃線時劃線工具至少要灼燒_________次。

Answer 1

【答案】牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞（營養(yǎng)成分沒有損失） ③④⑤⑥⑦④⑧ B 6.4×108 偏小 （形狀、大小、顏色、光澤度）不同 B 5

【解析】

滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子），常用的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌，適用對象主要有接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等。消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子），常用的方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法，適用對象主要有操作空間、某些液體、雙手等，稀釋涂布平板法常用來進(jìn)行微生物的計數(shù)。

（1）常用的消毒方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法。巴氏消毒的方法是指70-75℃煮30分鐘或80℃煮15分鐘，使用這種方法對生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞。

（2）a.首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜；b.放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品；c.加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)；d.用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣；e.滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品．如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染；f.將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。故高壓蒸汽鍋滅菌的操作步驟：①裝入待滅菌物品，②加蓋，③加熱滅菌鍋，④打開排氣閥，⑤關(guān)閉排氣閥，⑥切斷電源，⑦壓力表的壓力降到零，④打開排氣閥，⑧打開蓋子，⑨取出滅菌物品。

（3）將液體菌種滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布的方法是稀釋涂布平板法，所用的接種工具是涂布器，即圖中的B。

（4）由于圖中稀釋了106倍，牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為（65+63+64）÷3÷0.1×106=6.4×108個。由于經(jīng)此方法接種培養(yǎng)時當(dāng)兩個或多個菌落重疊在一起時按一個菌落計算，所以運用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實際值偏小。如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)（形狀、大小、顏色、光澤度）不同的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染。

（5）要進(jìn)一步分離純化乳酸菌采用平板劃線法進(jìn)行操作，圖中所示的平板劃線分離的操作正確的是B圖，接種環(huán)在每次接種前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來滅菌，所以完成圖4次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，以防止造成污染，因此完成圖B劃線共需灼燒接種環(huán)5次。