Question

【題目】白細胞介素－2(IL－2)，在人體中是由免疫細胞合成并分泌的一種糖蛋白，對機體的免疫應答和抗病毒感染等有重要作用。傳統(tǒng)生產(chǎn)方法成本高、產(chǎn)量低，獲得的IL－2在體外不易保存。用生物技術手段可以解決這些問題。請回答下列相關問題：

（1）利用基因工程生產(chǎn)IL－2的過程：

①從健康人體外周靜脈血分離能合成IL－2的免疫細胞，從中提取________，經(jīng)逆轉錄過程獲取目的基因。此過程需要的原料是________________。

②用限制酶處理載體和目的基因后，再用DNA連接酶處理，形成重組載體，該載體的化學本質(zhì)是____________。該步驟是基因操作的核心，稱為______________________。

③若選擇大腸桿菌作為受體細胞，常用的轉化方法是用Ca2＋處理，使其成為________________，再在一定溫度下完成轉化。

④在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，經(jīng)進一步處理獲得產(chǎn)物，進行產(chǎn)物鑒定時可采用________技術。

（2）利用蛋白質(zhì)工程對IL－2進行改造，基本途徑是預期蛋白質(zhì)功能→________________→________________→找到相對應的脫氧核苷酸序列。

Answer 1

【答案】mRNA 4種游離的脫氧核苷酸 小型環(huán)狀DNA分子 構建基因表達載體 感受態(tài)細胞 抗原-抗體雜交 設計預期蛋白質(zhì)的結構 推測氨基酸序列

【解析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）①逆轉錄是指以mRNA為模板合成DNA，因此從健康人體的外周靜脈血分離能合成干擾素的免疫細胞，從中提取mRNA，經(jīng)反轉錄獲取目的基因，該過程所需的原料是4種游離的脫氧核糖核苷酸。

②該載體為質(zhì)粒，其化學本質(zhì)是小型環(huán)狀DNA。基因工程的核心步驟是構建基因表達載體。

③將目的基因導入微生物細胞常用感受態(tài)轉化法，即常用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞，在一定溫度條件下完成轉化。

④檢測目的基因是否表達產(chǎn)生產(chǎn)物可采用抗原-抗體雜交技術。

（2）利用蛋白質(zhì)工程對干擾素進行改造，基本途徑是：預期蛋白質(zhì)功能→設計預期蛋白質(zhì)結構→推測氨基酸序列→找到對應的脫氧核苷酸序列。