Question

RT-PCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù)，具體過程如圖所示：

（1）過程Ⅰ需要加入緩沖液、原料、

 

、

 

 和引物A等．
（2）過程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是

 

，該反應(yīng)體系中所用的Taq酶至少應(yīng)能耐受

 

℃．
（3）過程Ⅱ擬對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上至少需要

 

 個(gè)引物B．
（4）利用RT-PCR技術(shù)獲取的目的基因

 

 （填“能”或“不能”）在物種之間交流；該技術(shù)還可用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè)，可提高檢測(cè)的靈敏度，原因是

 

．
（5）RT-PCR過程中主要借助對(duì)

 

 的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行．

Answer 1

考點(diǎn)：用DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增

專題：

分析：1、分析圖示，過程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的過程，表示逆轉(zhuǎn)錄．過程Ⅱ先使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開，再以單鏈的DNA合成雙鏈的DNA，最后利用RCR技術(shù)進(jìn)行DNA復(fù)制．
2、PCR技術(shù)的原理是模擬生物體內(nèi)DNA分子復(fù)制的過程，利用DNA分子熱變形原理，通過控制溫度控制控制DNA分子的解聚和結(jié)合，DNA分子體內(nèi)復(fù)制過程DNA的解旋是在解旋酶的作用下實(shí)現(xiàn)的；PCR擴(kuò)增DNA片段過程最高經(jīng)過n次擴(kuò)增，形成的DNA分子數(shù)是2ⁿ個(gè)，其中只有2條單鏈不含有引物．

解答： 解：（1）過程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的過程，表示逆轉(zhuǎn)錄，需要加入緩沖液、原料、RNA提取物、逆轉(zhuǎn)錄酶和引物A等．
（2）過程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開，該反應(yīng)體系中所用的Taq酶至少應(yīng)能耐受95℃．
（3）過程Ⅱ擬對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上至少需要2^n-1個(gè)引物B．
（4）利用RT-PCR技術(shù)獲取的目的基因能在物種之間交流；該技術(shù)還可用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè)，可提高檢測(cè)的靈敏度，原因是增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)．
（5）RT-PCR過程中主要借助對(duì)溫度的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行．
故答案為：
（1）RNA提取物     逆轉(zhuǎn)錄酶
（2）讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開（答對(duì)一點(diǎn)即得分）   95℃
（3）2^n-1
（4）能     增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)
（5）溫度

點(diǎn)評(píng)：本題考查了基因工程和PCR技術(shù)及其應(yīng)用過程，對(duì)于RNA的逆轉(zhuǎn)錄、DNA分子復(fù)制、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片的理解把握知識(shí)點(diǎn)間的內(nèi)在聯(lián)系及堿基互補(bǔ)配對(duì)原則的應(yīng)用是解題的關(guān)鍵．