Question

【題目】干擾素（INF）通過與細(xì)胞表面相應(yīng)受體結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白而實現(xiàn)其抗病毒作用�？蒲腥藛T將人的INF受體基因?qū)�入小鼠�?xì)胞內(nèi)，在小鼠細(xì)胞中高效表達INF受體，從而提高了小鼠對INF的敏感程度，增強了其抗病毒能力。請回答下列問題：

（1）獲取INF受體基因時，需要提取人體細(xì)胞中的mRNA，再加入______酶合成cDNA。提取人體細(xì)胞的mRNA時需要加入RNA酶抑制劑，以避免________。與基因組文庫相比，cDNA文庫中的____________（填“部分基因”或“全部基因”）可以在不同物種間交流。

（2）利用PCR擴增目的基因時，在DNA雙鏈解開后，要適當(dāng)降低體系溫度，目的是___________。

（3）將含有INF受體基因的重組載體導(dǎo)入小鼠細(xì)胞的方法為___________，其受體細(xì)胞一般是___________。若要判斷INF受體基因是否成功被導(dǎo)入受體細(xì)胞，需要利用基因探針進行檢測，基因探針指的是____________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄??? 提取的mRNA被RNA酶水解；??? 全部基因??? 便于引物與模板鏈相結(jié)合??? 顯微注射法??? 受精卵??? 用放射性同位素標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段???

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因??DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA??分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)??抗原?抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）cDNA文庫是以mRNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄的方法獲得的，cDNA文庫構(gòu)建過程需要加入逆轉(zhuǎn)錄酶。提取人體細(xì)胞的mRNA時需要加入RNA酶抑制劑，目的是避免提取的mRNA被機體的RNA酶催化水解。與基因組文庫相比，cDNA文庫中的全部基因不含有內(nèi)含子序列，可以在不同物種間進行交流。

（2）利用PCR擴增目的基因時，在DNA雙鏈解開后.要適當(dāng)降低體系溫度，目的是便于引物與模板鏈相結(jié)合。若溫度過高，引物不能與模板鏈結(jié)合。
（3）將含有INF受體基因的重組載體導(dǎo)入小鼠細(xì)胞的方法為顯微注射法，動物基因工程的受體細(xì)胞一般是受精卵，進行DNA分子雜交技術(shù)時所用的基因探針是指用放射性同位素標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段。