Question

（七）回答下列有關(guān)基因工程和酶工程的有關(guān)問題
如圖所示為利用現(xiàn)代生物技術(shù)獲得能表達(dá)某蛋白酶工程菌的過程．選用質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)．請(qǐng)回答：

（1）構(gòu)建含目的基因的重組質(zhì)粒A時(shí)，應(yīng)選用限制酶

 

，對(duì)

 

進(jìn)行切割．再用

 

進(jìn)行重組．
（2）圖中質(zhì)粒同時(shí)用PstⅠ和ApaⅠ酶切，產(chǎn)生1800對(duì)堿基和8200對(duì)堿基的兩種片段，如用以上四種酶同時(shí)切割此質(zhì)粒，則產(chǎn)生600對(duì)堿基和8200對(duì)的堿基兩種片段，那么用同時(shí)用PstⅠ和EcoRⅠ酶切，則產(chǎn)生的片段有

 

．
（3）篩選后所得到的工程菌增值后表達(dá)出大量此蛋白酶，但此蛋白酶不會(huì)分泌到細(xì)胞外，因此還需要利用酶工程中的

 

技術(shù)獲得此蛋白酶，
（4）獲得此蛋白酶后，利用酶的固定化技術(shù)能回收和重復(fù)利用此蛋白酶，以下屬于固定化技術(shù)中的載體結(jié)合法的是

 

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的應(yīng)用

專題：

分析：抓住限制酶的特異性以及表達(dá)載體組成成分．蛋白酶是蛋白質(zhì)不會(huì)分泌到細(xì)胞外，要想獲得此蛋白酶，只有破碎細(xì)胞，并分離提純．為了能被反復(fù)使用和與反應(yīng)物分離，可以固定化酶．可以用物理的或化學(xué)的方法固定化．

解答： （1）目的基因上PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ切割位點(diǎn)，質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ切割位點(diǎn)．切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA需要同種限制酶．但是目的基因上也有SmaⅠ切割位點(diǎn)，所以選用PstI、EcoRI 切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA．構(gòu)建表達(dá)載體需要DNA連接酶．    故答案為：PstI、EcoRI     質(zhì)粒和含目的基因的DNA     DNA連接酶
（2）質(zhì)粒同時(shí)用PstⅠ和ApaⅠ酶切，產(chǎn)生1800對(duì)堿基和8200對(duì)堿基的兩種片段，說明質(zhì)粒上含有10000個(gè)堿基對(duì)．用以上四種酶同時(shí)切割此質(zhì)粒，則產(chǎn)生600對(duì)堿基和8200對(duì)的堿基兩種片段，則說明PstⅠ和SmaⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ、EcoRⅠ和ApaⅠ切割位點(diǎn)間的都含有600對(duì)堿基．那么用同時(shí)用PstⅠ和EcoRⅠ酶切，則產(chǎn)生的片段有600+600=1200對(duì)堿基（PstⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ之間的堿基）和600+8200=8800對(duì)堿基（EcoRⅠ、ApaⅠ和PstⅠ之間的堿基）．    故答案為1200對(duì)堿基、8800對(duì)堿基（3）工程菌增值后表達(dá)出大量此蛋白酶，但此蛋白酶不會(huì)分泌到細(xì)胞外，要想獲得此蛋白酶，可以利用血紅蛋白的提取和鑒定方法進(jìn)行破碎細(xì)胞并分離提純獲得．    故答案為：分離提純（4）酶本身還是溶于水的，用物理的或化學(xué)的方法使酶與水不溶性大分子載體結(jié)合或把酶包埋在其中．化學(xué)法包括結(jié)合法、交聯(lián)法．吸附法和共價(jià)鍵法又可統(tǒng)稱為載體結(jié)合法．A、B是包埋法，C是吸附法，D是交聯(lián)法．故選C

點(diǎn)評(píng)：意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系；理論聯(lián)系實(shí)際，綜合運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決自然界和社會(huì)生活中的一些生物學(xué)問題的能力和從題目所給的圖形中獲取有效信息的能力．