Question

（8分）CTAB法是一種從高等真核生物細(xì)胞中制備基因組DNA（總DNA）的技術(shù)。CTAB能跟核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液(＞0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且穩(wěn)定存在，當(dāng)降低溶液中鹽的濃度(＜0.3mol/L的NaCl溶液)，CTAB - 核酸的復(fù)合物就會(huì)因溶解度降低而沉淀，再用70% 酒精浸泡可洗脫掉CTAB；氯仿能使蛋白質(zhì)發(fā)生變性而沉淀。提取和檢測水稻基因組DNA的操作步驟如下：

① 在50ml離心管中加入20mlCTAB抽提緩沖液（主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB），于65℃水浴中預(yù)熱；

②將20 g新鮮的水稻幼嫩葉片剪成小段后放于研缽中，用液氮速凍并研磨成粉末，加入上述離心管中，于65℃水浴中保溫30min；

③ 取出離心管中，冷卻至室溫，加入20mL的氯仿，輕輕混勻20min；

④ 在室溫下以 12000r/min的轉(zhuǎn)速離心10-20 min；

⑤ 將上清液移入另一個(gè)離心管中，加入2/3體積的經(jīng)冷卻的異丙醇，用玻璃棒輕輕攪動(dòng)，

小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的復(fù)合物沉淀；

⑥ 將沉淀移入另一個(gè)離心管中，加入70%乙醇洗滌，重復(fù)洗滌1-2次；

⑦ 吹干乙醇后，將DNA溶于適量的TE緩沖液中，在0.8%的瓊脂糖凝膠上電泳分離并在核酸紫外檢測儀上觀察。

請(qǐng)回答下列問題：

（1）植物基因組DNA（總DNA）的提取通常采用機(jī)械研磨的方法，常溫下研磨時(shí)，植物細(xì)胞勻漿含有多種酶類對(duì)DNA的提取產(chǎn)生不利的影響。用液氮速凍，材料在研磨時(shí)易于破碎，同時(shí)還具有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的作用。

（2）實(shí)驗(yàn)步驟③ 、④的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（3）實(shí)驗(yàn)步驟⑤中，玻璃棒上出現(xiàn)沉淀的主要原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（4）對(duì)DNA進(jìn)行定性檢測常用的試劑是＿＿＿＿＿。瓊脂糖凝膠電泳是利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，使帶電分子產(chǎn)生＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿而實(shí)現(xiàn)分離。DNA在260nm的紫外線波段有一強(qiáng)烈的吸收峰，利用核酸紫外檢測儀可以進(jìn)行＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

 

Answer 1

【答案】

（8分）

（1）降低細(xì)胞勻漿中酶的活性，避免對(duì)DNA的提取產(chǎn)生不利影響

（2）去除溶液中的蛋白質(zhì)（使蛋白質(zhì)變性和沉淀）

（3）溶液中NaCl的濃度＜0.3mol/L，CTAB - 核酸的復(fù)合物因溶解度降低而沉淀

（4）二苯胺     分子大小     形狀的不同     不同的遷移速度

DNA含量的測定（或檢測DNA）

【解析】