Question

12．為了調(diào)查某城市自來(lái)水的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了自來(lái)水水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作．回答下列問(wèn)題：
（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量．涂布平板所用的培養(yǎng)基是固體（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基的制備過(guò)程是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌．在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白培養(yǎng)基培養(yǎng)了一段時(shí)間，若空白培養(yǎng)基出現(xiàn)了菌落．請(qǐng)分析說(shuō)明原因（寫(xiě)出二個(gè)）①培養(yǎng)基滅菌不合格②倒平板過(guò)程被污染（或培養(yǎng)皿滅菌不合格）．
（2）培養(yǎng)基滅菌后，將1mL水樣稀釋1000倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為51、50和49．據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為5.0×10⁸．
（3）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌．操作時(shí)，每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端．

Answer 1

分析 1、微生物常見(jiàn)的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、劃線分離操作中的有關(guān)問(wèn)題：
（1）在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)．

	第一次灼燒	每次劃線之前灼燒	劃線結(jié)束灼燒
目的	避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基	殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種	殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染或感染操作者

②在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種．
③在進(jìn)行第二次以及其后的劃線操作時(shí)'要從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線．每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落．
（2）進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)，要將培養(yǎng)皿倒置的原因如果正放培養(yǎng)皿，則皿蓋上形成的水滴會(huì)落入培 養(yǎng)基表面并且擴(kuò)散開(kāi)．如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則茵落中的細(xì)菌會(huì)隨水?dāng)U散，菌落間相互影響，很難再分成單菌落，達(dá)不到分離的目的．因此恒溫培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿必須倒置．
（3）培養(yǎng)后判斷是否有雜菌污染的方法
①?gòu)木�落的形態(tài)看，是否濕潤(rùn)、透明、黏稠，呈何種顏色等等，是區(qū)別細(xì)菌、酵母菌、放線菌和霉菌的關(guān)鍵指標(biāo)．
②用顯微鏡鏡檢觀察其形態(tài)、大小，看是否有菌絲、孢子、芽孢等，這也是區(qū)別細(xì)菌、酵母菌、放線菌和霉菌的關(guān)鍵指標(biāo)．

解答 解：（1）涂布平板所用的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基的制備過(guò)程是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌．在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白培養(yǎng)基培養(yǎng)了一段時(shí)間，若空白培養(yǎng)基出現(xiàn)了菌落，其可能原因是：①培養(yǎng)基滅菌不合格；②倒平板過(guò)程被污染（或培養(yǎng)皿滅菌不合格）．
（2）培養(yǎng)基滅菌后，將1mL水樣稀釋1000倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為51、50和49．據(jù)此可得出每升水樣（1L=1000mL）中的活菌數(shù)=$\frac{51+50+49}{3}×$1000×10×1000=5.0×10⁸．
（3）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌．操作時(shí)，每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于 上次劃線的末端．
故答案為：
（1）固體     計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板     高壓蒸汽滅菌    培養(yǎng)基滅菌不合格     倒平板過(guò)程被污染（或培養(yǎng)皿滅菌不合格）
（2）5.0×10⁸  
（3）殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留      上次劃線的末端

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查培養(yǎng)基的制作和微生物的接種方法，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)室的微生物的培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)的理解與掌握．