Question

17．為增加油菜種子的含油量，科研人員將轉(zhuǎn)運肽基因與酶D基因相連，導人油菜細胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．

（1）研究人采用PCR技術(shù)獲取酶D基因和轉(zhuǎn)運肽基因，該技術(shù)是利用DNA雙鏈復制的原理，使相應基因呈指數(shù)增加．所含三種限制酶（Xbal、Clal、SacI）的切點如圖所示，則用ClaⅠDNA連接和酶處理兩個基因后，可得到兩基因相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入圖所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建基因表達載體并導入農(nóng)桿菌中．為了獲得含融合基因的單菌落，應進行的操作是將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)．隨后再利用液體培養(yǎng)基將該單菌落振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液．
（3）剪取油菜的葉片放人侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細胞，依據(jù)細胞具有全能性的原理，可將其培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）用抗原-抗體雜交法可檢測轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

Answer 1

分析 1、基因文庫包括cDNA文庫、基因組文庫等．某個群體包含一種生物所有的基因的文庫叫基因組文庫，而用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補DNA片段屬于cDNA文庫．
2、限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．同種限制酶切割能夠產(chǎn)生相同的黏性末端，便于質(zhì)粒和目的基因連接．

解答 解：（1）PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復制；在上述引物設(shè)計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達載體即重組質(zhì)粒并導入農(nóng)桿菌中．由圖可知四環(huán)素抗性基因是標記基因，因此將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞．將轉(zhuǎn)基因植物細胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因植株需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，其原理是植物細胞具有全能性．
（4）檢測目的基因是否成功表達，應該采用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）DNA雙鏈復制      ClaⅠDNA連接
（2）T-DNA     將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)
（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細�?nbsp;    細胞具有全能性
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生能夠掌握目的基因獲取的方法，能夠結(jié)合圖解中限制酶切點選擇合成的工具酶獲得融合基因，同時掌握目的基因?qū)�入受體細胞以及目的基因檢測與鑒定的方法等．