Question

【題目】根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：

（1）限制性內(nèi)切酶主要來源于生物，切割ＤＮＡ分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有 。

（2）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即

（3）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是 ，若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用 技術(shù)，該技術(shù)所需要的條件有模板DNA、引物、 、原料和能量等。

（4）基因工程中除質(zhì)粒外， 和動植物病毒也可作為運載體。

（5）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，而是應該用 進行處理。

Answer 1

【答案】

（1）原核黏性末端和平末端

（2）E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶

（3）mRNAPCRTaq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）

（4）入噬菌體的衍生物

（5）Ca2+

【解析】（1）經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶切割后能形成兩種類型的末端，即平末端和黏性末端．（2））DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T4DNA連接酶．這二者都能連接黏性末端，此外T4DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低．（3）反轉(zhuǎn)錄是以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄先合成單鏈DNA，再合成雙鏈DNA，利用PCR技術(shù)進行大量擴增．；（4）基因工程常用的運載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．

（5）當受體細胞是細菌時，為了增大導入的成功率，常用Ca2+處理，得到感受態(tài)細胞，此時細胞壁和細胞膜的通透性增大，容易吸收重組質(zhì)粒．未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱．

生物種類	植物細胞	動物細胞	微生物細胞
常用方法	農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法	顯微注射技術(shù)	Ca2+處理法
受體細胞	體細胞	受精卵	原核細胞
轉(zhuǎn)化過程	將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上→農(nóng)桿菌→導入植物細胞→整合到受體細胞的DNA→表達	將含有目的基因的表達載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動物	Ca2+處理細胞→感受態(tài)細胞→重組表達載體與感受態(tài)細胞混合→感受態(tài)細胞吸收DNA分子