Question

19．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院成功培育出了轉(zhuǎn)腸乳糖酶基因的“低乳糖奶牛”．這頭奶牛所產(chǎn)牛奶中不含乳糖或含量很低．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要獲取僅在（優(yōu)良）奶牛乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的啟動(dòng)子，以使乳汁中的乳糖含量降低．構(gòu)成啟動(dòng)子的基本單位是脫氧核苷酸．
（2）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入奶牛受精卵細(xì)胞常用的方法是顯微注射法，與早期胚胎細(xì)胞和體細(xì)胞相比較，受精卵細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)是具有全能性，能直接發(fā)育成新個(gè)體．
（3）受精卵經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)，形成桑椹胚或囊胚，再移植到受體母牛體內(nèi)，移植到受體母牛子宮內(nèi)的胚胎能夠存活的原因是受體母畜對(duì)移入的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)．
（4）進(jìn)行胚胎移植操作前，需要對(duì)取自早期胚胎的滋養(yǎng)層細(xì)胞利用DNA分子雜交（或DNA探針）技術(shù)進(jìn)行DNA分析，以鑒定其性別．人的腸乳糖酶基因在奶牛中是否成功表達(dá)，可以采用抗原-抗體雜交進(jìn)行檢測(cè)，其中的抗原是指人的腸乳糖酶．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）由于細(xì)胞中基因選擇性表達(dá)，所以在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要獲取僅在優(yōu)良奶牛乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的啟動(dòng)子，以使乳汁中的乳糖含量降低．由于啟動(dòng)子位于質(zhì)粒DNA上，所以構(gòu)成啟動(dòng)子的基本單位是脫氧核苷酸．
（2）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入奶牛受精卵細(xì)胞常用的方法是顯微注射法．與早期胚胎細(xì)胞和體細(xì)胞相比較，受精卵細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)是具有全能性，能直接發(fā)育成新個(gè)體．
（3）受精卵經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)，形成桑椹胚或囊胚，再移植到受體母牛體內(nèi)，移植到受體母牛子宮內(nèi)的胚胎能夠存活的原因是受體母畜對(duì)移入的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)．
（4）進(jìn)行胚胎移植操作前，需要對(duì)取自早期胚胎的滋養(yǎng)層細(xì)胞利用DNA分子雜交（或DNA探針）技術(shù)進(jìn)行DNA分析，以鑒定其性別．人的腸乳糖酶基因在奶牛中是否成功表達(dá)，可以采用抗原-抗體雜交進(jìn)行檢測(cè)，其中的抗原是指人的腸乳糖酶．
故答案為：
（1）（優(yōu)良）奶牛乳腺    脫氧核苷酸
（2）顯微注射法    具有全能性，能直接發(fā)育成新個(gè)體
（3）桑椹胚或囊胚      受體母畜對(duì)移入的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)
（4）DNA分子雜交（或DNA探針）     人的腸乳糖酶

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作步驟及各步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題；識(shí)記胚胎移植的過(guò)程、對(duì)象及生理學(xué)基礎(chǔ)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．