Question

現(xiàn)代生物技術(shù)
埃博拉病毒（EBO）呈纖維狀，目前分離出五種類型，其中EBOV是一種烈性的、泛嗜性的病毒，它首先破壞吞噬細(xì)胞，其次是肝、脾等細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致血管通透性增加，出現(xiàn)嚴(yán)重的出血熱現(xiàn)象．目前尚無針對(duì)該病毒的特效藥或疫苗．

（1）EBOV感染者的血清中很難形成高濃度的抗體，這是因?yàn)?div id="wlhwbfh" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

．
（2）較難制作EBO疫苗的原因與其遺傳物質(zhì)的種類以及表達(dá)方式有關(guān)．EBO病毒容易變異，這是因?yàn)?div id="xousk9q" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),人體免疫系統(tǒng)在維持穩(wěn)態(tài)中的作用,單克隆抗體的制備過程

專題：

分析：分析圖1：圖1表示單克隆抗體的制備過程，其中①表示獲取漿細(xì)胞的過程；②表示細(xì)胞融合過程；③表示利用雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)單克隆抗體．
分析圖2：EBO衣殼外有包膜，包膜上有5種蛋白棘突，其中GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別．
分析圖3：圖3是EBO基因組；
分析圖4：圖4是腺病毒基因組，其中基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因．
分析圖5：圖5表示轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)EBO蛋白疫苗與重組病毒粒子疫苗的基本過程．
分析圖6：圖6是質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖，其中neo是新霉素抗性基因，amp表示氨芐青霉素抗性基因，ori是質(zhì)粒的復(fù)制子，該質(zhì)粒中有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ的作用位點(diǎn)．
分析圖7：圖7是含有目的基因的外源DNA分子．

解答： 解：（1）根據(jù)題干信息“首先破壞吞噬細(xì)胞”可知，EBOV感染者的血清中很難形成高濃度的抗體的原因是病毒最先侵染并破壞巨噬細(xì)胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生．
（2）EBO病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，而RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差，容易變異，因此較難制作EBO疫苗．
（3）EBO基因組為單股負(fù)鏈RNA，負(fù)鏈RNA的互補(bǔ)鏈才能與核糖體結(jié)合．因此，EBO基因組在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白質(zhì)的過程是：RNA→RNA

翻譯

蛋白質(zhì)．
（4）圖1表示單克隆抗體的制備過程，其中過程①表示給小鼠注射特定抗原，進(jìn)而獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞，即圖中甲細(xì)胞；過程②是將漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的過程；漿細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，但在體外培養(yǎng)條件下不能無限增殖，因此所用瘤細(xì)胞的作用是能不斷分裂，提高抗體的產(chǎn)量．
（5）要獲得純凈的單一品種抗體，上述操作的要點(diǎn)是一個(gè)淋巴細(xì)胞與一個(gè)腫瘤細(xì)胞結(jié)合．
（6）根據(jù)題干信息“GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別”可知，該技術(shù)的目的基因是G蛋白基因．
（7）以EBO病毒包膜蛋白作為疫苗比較安全，原因是蛋白質(zhì)不具侵染性，不會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)；但蛋白質(zhì)不能復(fù)制，因此疫苗量較少，引起的免疫反應(yīng)效果較弱．
（8）生產(chǎn)含目的基因重組病毒粒子作為目的基因的運(yùn)載體，其優(yōu)點(diǎn)是能通過主動(dòng)侵染細(xì)胞運(yùn)載目的基因；根據(jù)題干信息“基因E與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)；基因L是腺病毒衣殼基因”可知，為保障安全，基因重組病毒粒子需要除去復(fù)制基因E和衣殼蛋白兩類基因．
（9）輔助質(zhì)粒攜帶EBO病毒上的這些基因，與EBO攜帶一樣，均能在真核細(xì)胞中表達(dá)，說明單個(gè)基因的表達(dá)與其所在載體無關(guān)．
圖6中neo是新霉素抗性基因，amp表示氨芐青霉素抗性基因，ori是質(zhì)粒的復(fù)制子，限制酶BamHⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ作用位點(diǎn)如下圖7．
（10）質(zhì)粒中含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ作用位點(diǎn)，但若用限制酶HindⅢ切割會(huì)破壞目的基因，若用限制酶PstⅠ切割會(huì)破壞復(fù)制子，因此，要能在大腸桿菌中不斷表達(dá)目的基因，同時(shí)又能提高重組效率，選擇的限制酶是BglII、BamHI．
（11）用限制酶BglII、BamHI切割會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，但不會(huì)破壞新霉素抗性基因，因此要篩選出成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，并準(zhǔn)確定位所需大腸桿菌的菌落，實(shí)驗(yàn)室至少需要兩種培養(yǎng)基，他們分別是含兩種抗生素的培養(yǎng)基和只含新霉素的培養(yǎng)基．
故答案為：
（1）病毒最先侵染并破壞巨噬細(xì)胞，影響抗原呈遞，阻斷了體液免疫的發(fā)生
（2）RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性較差
（3）RNA→RNA

翻譯

蛋白質(zhì) 
（4）B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞     細(xì)胞融合      能不斷分裂，提高抗體的產(chǎn)量
（5）一個(gè)淋巴細(xì)胞與一個(gè)腫瘤細(xì)胞結(jié)合
（6）G蛋白基因
（7）蛋白質(zhì)不具侵染性，不會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)    不能復(fù)制，疫苗量較少，引起的免疫反應(yīng)效果較弱
（8）能通過主動(dòng)侵染細(xì)胞運(yùn)載目的基因    復(fù)制基因E和衣殼蛋白
（9）單個(gè)基因的表達(dá)與其所在載體無關(guān)
（10）BglII  BamHI
（11）含兩種抗生素的培養(yǎng)基和只含新霉素的培養(yǎng)基

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖解，考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具、操作步驟，掌握各步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合圖中和題中信息準(zhǔn)確答題，綜合性較強(qiáng)，有一定難度．