Question

腎小管間質(zhì)炎癥損傷有關(guān)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究表明．由于腎小管上皮細(xì)胞中的骨調(diào)素（OPN）的過度表達(dá)，巨噬細(xì)胞趨化性浸潤(rùn)，造成腎小管浸潤(rùn)炎癥損傷，可利用基因工程方法，采用反義RNA技術(shù)對(duì)培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞骨調(diào)素表達(dá)量進(jìn)行調(diào)節(jié)，回答有關(guān)問題：
（1）基因工程設(shè)計(jì)思路是通過向

 

細(xì)胞中導(dǎo)入

 

基因的方法，從而

 

細(xì)胞中OPN的表達(dá)量．
（2）用

 

酶處理含全長(zhǎng)cDNA的重組質(zhì)粒后獲得全長(zhǎng)cDNA．用

 

酶將cDNA以

 

兩種方式與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相連．脂質(zhì)體是由

 

雙分子層組成，利用其

 

特點(diǎn)將目的基因?qū)�入到培養(yǎng)的細(xì)胞．
（3）目的基因表達(dá)檢測(cè)：
①目的基因整合檢測(cè)：
引物A（載體1511-1530）：5’-GTCAAGCCCTTTGTACACCC-3'
引物B（OPN761-740）：5'-ACTGCTCCAGGCTGTGTGTTTC-3'
引物C（OPN332-352）：5'-ATGGACGATGAT-3'
②用引物A和引物B擴(kuò)增正向插入OPNcDNA片段，用引物

 

和引物

 

擴(kuò)增反向插入OPNcDNA片段．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：反義RNA一般是指與編碼鏈或有義鏈互補(bǔ)的DNA鏈編碼的RNA，mRNA是由編碼鏈或有義鏈編碼的RNA，所以反義RNA和mRNA分子能互補(bǔ)結(jié)合呈雙鏈RNA．由于核糖體不能翻譯雙鏈的RNA，所以反義RNA與mRNA特異性的互補(bǔ)結(jié)合抑制了翻譯過程．

解答： 解：（1）由于腎小管上皮細(xì)胞中的骨調(diào)素的過度表達(dá)，巨噬細(xì)胞趨化性浸潤(rùn)，造成腎小管浸潤(rùn)炎癥損傷，所以基因工程設(shè)計(jì)思路是通過向腎小管上皮細(xì)胞中導(dǎo)入骨調(diào)素mRNA的反義RNA基因的方法，使轉(zhuǎn)錄形成的反義RNA與mRNA特異性的互補(bǔ)結(jié)合抑制翻譯過程，從而抑制細(xì)胞中OPN的表達(dá)量．
（2）目的基因的獲得需要用限制性核酸內(nèi)切酶切割含全長(zhǎng)cDNA的重組質(zhì)粒后獲得全長(zhǎng)cDNA，并用DNA連接酶將cDNA以正接和反接兩種方式與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相連．由于脂質(zhì)體是由磷脂雙分子層組成，具有一定的流動(dòng)性，從而可以將目的基因?qū)�入到培養(yǎng)的細(xì)胞．
（3）根據(jù)引物中的堿基序列，用引物A和引物B擴(kuò)增正向插入OPNcDNA片段，用引物A和引物C擴(kuò)增反向插入OPNcDNA片段即可．
故答案為：
（1）腎小管上皮   骨調(diào)素mRNA的反義RNA   抑制
（2）限制性核酸內(nèi)切   DNA連接酶   正接和反接   磷脂    流動(dòng)性
（3）引物A和引物C

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力．