Question

【題目】(一）請回答利用枯草桿菌生產α-淀粉酶及酶固定化實驗的有關問題：

（1）篩選高表達菌株的最簡便方法之一是：___________。 一般通過_______兩種手段實現(xiàn)。篩選出的菌株在發(fā)酵生產之前還需利用_________培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)。

（2）利用物理或化學的方法將 α-淀粉酶固定在_______的介質上成為固定化酶。

（3）實驗過程中涉及兩次蒸餾水洗滌反應柱的操作， 所用的蒸餾水體積為裝填體積的________，第二次洗滌的目的是除去________。

（4）從反應柱下端接取少量流出液進行 KI-I2 顏色測試，結果未呈現(xiàn)紅色。下列有關此現(xiàn)象 的解釋錯誤的是：________。

A.反應柱中沒有α-淀粉酶被固定

B.流速過快淀粉未被水解

C.接取的流出液是蒸餾水

D.流速過慢淀粉被水解成葡萄糖

（二）毛角蛋白Ⅱ型中間絲（KIF-Ⅱ）基因與絨山羊的羊絨質量密切相關。獲得轉 KIF-Ⅱ 基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖：

（1）轉基因過程用到的工具酶有______和________。

（2）在過程②中，用_______處理將皮膚租住分散成單個成纖維細胞。由于人們對動 物細胞所需營養(yǎng)物質還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入一定量的_________，在培養(yǎng)過程中，應將培養(yǎng)瓶置于________中培養(yǎng)。

（3）若要獲得多只相同的轉基因山羊， 可對圖中早期胚胎進行______后進行胚胎移植。

（4）下列有關基因工程的敘述，正確的是_______________。

A.切割目的基因和載體DNA 時為獲得相同的粘性末端，必須用相同的核酸內切酶

B.基因工程的原理是基因重組，其核心是上圖中的過程④

C.圖示過程獲得的轉基因絨山羊并不是克隆動物

D.重組表達載體上含有 RNA 聚合酶的識別位點

Answer 1

【答案】 單菌落分離 劃線分離和（稀釋）涂布分離 液體 非水溶性 10倍 殘留的淀粉溶液 D 限制性核酸內切酶 DNA連接酶 胰蛋白酶 動物血清 CO2培養(yǎng)箱 胚胎分割 D

【解析】試題分析：根據(jù)題意和圖示分析可知：圖示表示獲得轉KIFⅡ基因的高絨質絨山羊的簡單流程圖，其中①表示基因表達載體的構建過程，該過程需要限制酶和DNA連接酶；②表示動物細胞培養(yǎng)過程，該過程需要采用胰蛋白酶處理組織塊以獲得單個細胞；③表示卵母細胞的采集和培養(yǎng)過程；④表示核移植過程。

（一）（1）篩選高表達菌株的最簡便方法之一是單菌落分離，一般通過劃線分離和（稀釋）涂布分離液體兩種手段實現(xiàn)，篩選出的菌株在發(fā)酵生產之前還需利用培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)。

（2）固定化酶就是利用物理或化學的方法將α‐淀粉酶固定在非水溶性的介質上。

（3）實驗過程涉及兩次蒸餾水洗滌反應柱的操作，所用的蒸餾水體積為裝填體積的10倍，第二次洗滌的目的是除去殘留的淀粉溶液。

（4）反應柱中沒有α-淀粉酶被固定，則淀粉不會被水解，導致KI-I2 顏色測試，結果未呈現(xiàn)紅色，A正確；流速過快淀粉未被水解，會導致結果未呈現(xiàn)紅色，B正確；接取的流出液是蒸餾水，則結果未呈現(xiàn)紅色，C正確；淀粉溶液經過α‐淀粉酶后的水解產物是糊精，不是葡萄糖，D錯誤。

（二）（1）轉基因過程中，獲取外源基因需要用限制性核酸內切酶對含有該基因的DNA片段進行切割，再利用DNA連接酶將目的基因了解到運載體上形成重組DNA。

（2）②表示動物細胞培養(yǎng)過程，該過程中常用胰蛋白（或膠原蛋白）酶處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入一定量的動物血清，以補充合成培養(yǎng)基不含有的成分；在培養(yǎng)過程中應將培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，以維持PH的穩(wěn)定。

（3）要獲得多只相同的轉基因山羊，可對圖中早期胚胎進行胚胎分割后進行胚胎移植。

（4）不同的限制酶也可以露出相同的黏性末端，A錯誤；過程①表示構建基因表達載體，是基因工程的核心步驟，B錯誤；圖示過程獲得的轉基因絨山羊是克隆動物，C錯誤；重組表達載體上含有 RNA 聚合酶的識別位點，可以催化轉錄的進行，D正確。