Question

11．回答基因工程的基本操作程序中的有關(guān)問(wèn)題．
（1）目的基因的獲�。簽樵诙虝r(shí)間內(nèi)大量獲得目的基因，可用PCR技術(shù)擴(kuò)增的方法，其原理是DNA復(fù)制．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：基因表達(dá)載體的組成，除具有復(fù)制原點(diǎn)、目的基因外，還必須具有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等．啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位．標(biāo)記基因的作用是為了鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：將目的基因?qū)�入某單子葉植物細(xì)胞，常采用的方法是基因槍法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞，常采用的受體細(xì)胞是受精卵；將目的基因?qū)�入大腸桿菌，大腸桿菌應(yīng)先用Ca²⁺處理，使其成為感受態(tài)細(xì)胞．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：檢測(cè)目的基因是否表達(dá)，在分子水平上可采用的檢測(cè)辦法是抗原-抗體雜交；在個(gè)體水平上，如抗蟲(chóng)棉，需要做抗蟲(chóng)的接種實(shí)驗(yàn)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）目的基因的獲取方法有：從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．其中PCR技術(shù)可在短時(shí)間內(nèi)大量獲得目的基因，其原理是DNA復(fù)制．
（2）基因表達(dá)載體的組成包括復(fù)制原點(diǎn)、目的基因外、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等，其中啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位．標(biāo)記基因的作用是為了鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞．
（3）將目的基因?qū)�入某單子葉植物細(xì)胞，常采用基因槍法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常采用的受體細(xì)胞是受精卵，因?yàn)槭芫�卵的全能性最高；將目的基因�(qū)�入大腸桿菌，常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即大腸桿菌應(yīng)先用Ca²⁺處理，使其成為感受態(tài)細(xì)胞．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：檢測(cè)目的基因是否表達(dá)，在分子水平上可采用的檢測(cè)辦法是抗原-抗體雜交；在個(gè)體水平上，如抗蟲(chóng)棉，需要做抗蟲(chóng)的接種實(shí)驗(yàn)．
故答案為：
（1）PCR技術(shù)　  DNA復(fù)制
（2）終止子   RNA聚合酶    鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞
（3）基因槍法  受精卵     Ca²⁺
（4）抗原-抗體雜交    抗蟲(chóng)的接種實(shí)驗(yàn)

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．