Question

【題目】研究表明，HER2/neu是一種原癌基因，它表達(dá)的H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)�？笻蛋白單克隆抗體能抑制過(guò)量表達(dá)H蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，目前已成為有效的生物治療手段。

（1）選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點(diǎn)，是因?yàn)镠蛋白在成年個(gè)體的正常組織中_____（填“低表達(dá)”或“高表達(dá)”）。H蛋白是一個(gè)跨膜蛋白，結(jié)構(gòu)如圖所示。制備免疫小鼠用的H蛋白（抗原）時(shí)，應(yīng)構(gòu)建____________區(qū)基因，轉(zhuǎn)入原核細(xì)胞表達(dá)并提純。

（2）將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，取該小鼠的脾臟細(xì)胞與______________細(xì)胞進(jìn)行融合，使用的化學(xué)誘導(dǎo)劑是_____________，細(xì)胞融合的原理是______________________。

（3）將融合細(xì)胞在_________________培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后培養(yǎng)基中只有雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，吸取有克隆生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)液中的__________（填“上清液”或“沉淀細(xì)胞”），應(yīng)用_____________技術(shù)進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)。經(jīng)多次篩選，就能得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（4）將篩選得到的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過(guò)______________或小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)，獲取大量的單克隆抗體。

（5）治療乳腺癌時(shí)，可單獨(dú)使用抗H蛋白單克隆抗體，也可將該單克隆抗體與抗癌藥物結(jié)合構(gòu)建“生物導(dǎo)彈”，殺死癌細(xì)胞。這充分體現(xiàn)了單克隆抗體____________的特點(diǎn)。

Answer 1

【答案】（1）低表達(dá) 胞外

（2）骨髓瘤 PEG（或聚乙二醇） 細(xì)胞膜的流動(dòng)性

（3）選擇 上清液 抗原—抗體雜交

（4）體外（培養(yǎng)）

（5）特異性強(qiáng)（或識(shí)別抗原部位專一）

【解析】

試題分析：（1）H蛋白在成年個(gè)體的正常組織中低表達(dá)，選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點(diǎn)，既能抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)，又對(duì)正常組織細(xì)胞影響較小。由于H蛋白是一個(gè)跨膜蛋白，只要選擇胞外區(qū)的基因進(jìn)行構(gòu)建，轉(zhuǎn)入原核細(xì)胞表達(dá)并提純即可獲得相應(yīng)抗原。

（2）取經(jīng)H蛋白處理的小鼠脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，化學(xué)誘導(dǎo)劑通常使用PEG，細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性。

（3）融合細(xì)胞需要用選擇培養(yǎng)基篩選出既能分泌抗體又能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞。利用抗原—抗體雜交技術(shù)來(lái)確定克隆生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)孔中的上清液中是否含有相應(yīng)的抗體。

（4）培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法有體外培養(yǎng)和小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)。

（5）單克隆抗體具有特異性強(qiáng)的特點(diǎn)