Question

10．復(fù)合型免疫缺陷癥（SCID）患者缺失ada基因，利用利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)將人正常ada基因轉(zhuǎn)入患者自身T細(xì)胞，可改善患者的免疫功能．如圖顯示該過程的主要步驟，回答下列問題：
（1）圖中所示獲取正常ada基因的方法是從基因文庫中獲取目的基因，基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫．若要大量獲取該目的基因，可通過PCR技術(shù)迸行擴(kuò)增．PCR技術(shù)是利用DNA復(fù)制的原理，將基因的核苷酸序列不斷加以復(fù)制．
（2）與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過程相比，PCR技術(shù)的不同點(diǎn)有：需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶作為催化劑將引物與目的基因DNA單鏈結(jié)合，另一個(gè)不同之處表現(xiàn)在溫度控制方面，在PCR中先用90～95℃左右高溫處理的目的是使DNA變性（解旋），而這一過程在細(xì)胞內(nèi)是通過解旋酶的催化作用實(shí)現(xiàn)的．
（3）將人正常ada基因轉(zhuǎn)入患者自身T細(xì)胞進(jìn)行治病的方法叫做基因治療．
（4）步驟②是構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組DNA）．在該步驟中，病毒DNA作為運(yùn)載體起作用，需使用的工具酶有限制酶和DNA連接酶．

Answer 1

分析 1、細(xì)胞中DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較：

		細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制	體外DNA擴(kuò)增（PCR）
不同點(diǎn)	解旋	在解旋酶作用下邊解旋邊復(fù)制	80～100℃高溫解旋，雙鏈完全分開
	酶	DNA解旋酶、DNA聚合酶	TaqDNA聚合酶
	引物	RNA	DNA、RNA
	溫度	體內(nèi)溫和條件	高溫
相同點(diǎn)		①需提供DNA模板 ②四種脫氧核苷酸為原料 ③子鏈延伸的方向都是從5'端到3'端

2、分析題圖：圖示顯示基因療法的兩個(gè)關(guān)鍵步驟，其中①表示獲取目的基因，②表示構(gòu)建基因表達(dá)載體．

解答 解：（1）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫，如cDNA文庫；PCR技術(shù)的原理是DNA復(fù)制．
（2）與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過程相比，PCR技術(shù)的不同點(diǎn)有：需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶作為催化劑將引物與目的基因DNA單鏈結(jié)合，另一個(gè)不同之處表現(xiàn)在溫度控制方面，在PCR中先用90～95℃左右高溫處理使DNA變性（解旋），而這一過程在細(xì)胞內(nèi)是通過解旋酶的催化作用實(shí)現(xiàn)的．
（3）將人正常ada基因轉(zhuǎn)入患者自身T細(xì)胞進(jìn)行治病的方法叫做基因治療．
（4）步驟②是構(gòu)建基因表達(dá)載體．在該步驟中，病毒作為運(yùn)載體起作用；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要限制酶切割運(yùn)載體和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．
故答案為：
（1）cDNA文庫     　DNA復(fù)制
（2）熱穩(wěn)定 　   　使DNA變性（解旋）　  　解旋酶
（3）基因治療
（4）構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組DNA）　運(yùn)載體     限制酶和DNA連接酶

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、概念、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)．