Question

13．某實驗小組欲從豆油污染的土壤中篩選出能高效降解脂肪的菌株．請回答：
（1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以豆油（脂肪）為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置．為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進行梯度稀釋（或系列稀釋）處理．為了排除培養(yǎng)基被污染，需設(shè)置接種等量無菌水的培養(yǎng)基作為空白對照．
（3）為了篩選出菌株，可將適量的蘇丹 III（蘇丹 IV）試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍出現(xiàn)透明圈，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶．純化菌種時，為了對活菌進行計數(shù)，可采用稀釋涂布平板法接種于新的培養(yǎng)基平板上．

Answer 1

分析 1、按用途分，分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基．
選擇培養(yǎng)基主要是培養(yǎng)、分離特定的微生物，培養(yǎng)酵母菌可在培養(yǎng)基中加入青霉素；鑒別培養(yǎng)基可以鑒定不同的微生物，比如鑒別飲用水中是否含有大腸桿菌，可以用伊紅-美藍培養(yǎng)基，如果菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤，說明有大腸桿菌．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．

解答 解：（1）欲篩選出能降解豆油的菌株，培養(yǎng)基中應(yīng)只含有豆油而無其它碳源，不能降解豆油的細菌在此培養(yǎng)基上不能生存，從功能上講，這類培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置．為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進行梯度稀釋處理．為了排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，需設(shè)置接種等量無菌水的培養(yǎng)基作為空白對照．
（3）脂肪可用蘇丹Ⅲ染液（或蘇丹Ⅳ染液）鑒定，呈橘黃色（或紅色）．由于脂肪遇蘇丹Ⅲ染液（或蘇丹Ⅳ染液）會出現(xiàn)紅色，所以為了篩選出菌株，可將適量的試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是出現(xiàn)透明圈、不出現(xiàn)紅色圈，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶．純化菌種時，為了對活菌進行計數(shù)，可采用稀釋涂布平板法接種于新的培養(yǎng)基平板上．
故答案為：
（1）豆油（脂肪）  選擇
（2）倒置  梯度稀釋（或系列稀釋） 等量無菌水
（3）蘇丹 III（蘇丹 IV）  稀釋涂布平板

點評 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠掌握選擇培養(yǎng)基選擇微生物的原理和方法，掌握稀釋涂布平板法的操作步驟，識記脂肪鑒定的原理等．