Question

回答下列有關(guān)基因工程的問題：
（1）獲取目的基因時，可從基因文庫中直接提取，而基因文庫包括

 

和

 

，其中要用到反轉(zhuǎn)錄技術(shù)的是

 

．
（2）構(gòu)建基因表達載體時，用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒運載體可產(chǎn)生“

CGATATCG…C C…GCTATAGC

”的片段，該限制酶識別的核苷酸序列是

 

，用限制酶Ⅱ切割含有目的基因的DNA，兩種酶切割DNA產(chǎn)生的末端能拼接到一起，則限制酶Ⅱ必須具有

 

的特點．作為一個完整的基因表達載體，必須具備啟動子、

 

（至少答出兩種）等．其中啟動子是

 

識別和結(jié)合的部位．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞時，如果受體細胞是水稻（單子葉植物）細胞，則常用的方法是

 

；如果受體細胞是大腸桿菌，則需要用鈣離子處理，處理后的細胞具有

 

的特點．
（4）檢測與鑒定目的基因時，檢測目的基因在真核細胞中能否穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因工程過程包括目的基因的獲取、基因表達載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細胞和目的基因的檢測與鑒定．
獲取目的基因的方法主要有兩種：
（1）從供體細胞的DNA中直接分離基因，最常用的方法是“鳥槍法”又叫“散彈射擊法“；
（2）人工合成基因，這種方法有兩條途徑，一是以目的基因轉(zhuǎn)錄的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，再在酶的作用下合成雙鏈DNA，即目的基因；另一條途徑是蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出信使RNA序列，再推測出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，然后用化學(xué)的方法以單核苷酸為原料合成．
限制酶具有特異性：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．形成黏性末端和平末端兩種．
將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．
（1）將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；
（2）將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；
（3）將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法（Ca²⁺處理法）．

解答： 解：（1）獲取目的基因時，可從基因文庫中直接提取，而基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫，其中要用到反轉(zhuǎn)錄技術(shù)的是部分基因文庫．
（2）構(gòu)建基因表達載體時，限制酶Ⅰ識別的核苷酸序列是-CGATATCG-．用限制酶Ⅱ切割含有目的基因的DNA，兩種酶切割DNA產(chǎn)生的末端能拼接到一起，則限制酶Ⅱ必須具有切割產(chǎn)生的粘性末端和限制酶Ⅰ切割產(chǎn)生的粘性末端相同的特點．一個完整的基因表達載體包括：目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因．目的基因是外源基因，是基因表達載體的必須組成；啟動子是基因表達載體的必須組成，是RNA聚合酶的識別位點；標(biāo)記基因的作用是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來；終止子是基因表達載體的必須組成，能終止轉(zhuǎn)錄過程．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞時，如果受體細胞是水稻（單子葉植物）細胞，則常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；如果受體細胞是大腸桿菌，則需要用鈣離子處理，處理后的細胞具有吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的特點．
（4）檢測與鑒定目的基因時，檢測目的基因在真核細胞中能否穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA上．
故答案為：
（1）基因組文庫     部分基因文庫     部分基因文庫
（2）-CGATATCG-切割產(chǎn)生的粘性末端和限制酶Ⅰ切割產(chǎn)生的粘性末端相同    標(biāo)記基因、終止子   RNA聚合酶
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法    吸收周圍環(huán)境中的DNA分子
（4）目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA上

點評：本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、工具及操作步驟，掌握獲取目的基因的幾種方法，能根據(jù)題干要求準(zhǔn)確判斷各選項，屬于考綱識記層次的考查．