Question

重組酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技術(shù)使乙肝病毒相關(guān)基因在酵母菌內(nèi)表達(dá)并大規(guī)模培養(yǎng)，從而提取制成疫苗．
（1）如圖是獲取目的基因的流程：

①圖中基因組文庫(kù)

 

（小于/等于/大于）cDNA文庫(kù)．
②B過(guò)程需要的酶是

 

；A、C過(guò)程中

 

（可以/不可以）使用同一種探針篩選含目的基因的菌株．
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構(gòu)建的文庫(kù)中分離外，還可以分別利用圖中

 

和

 

為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該過(guò)程中所用酶的顯著特點(diǎn)是

 

．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)用限制酶切割DNA后可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端，后者需用

 

（E?coil/T₄）DNA連接酶通過(guò)催化

 

鍵使目的基因與質(zhì)粒連接起來(lái)．為使目的基因在酵母菌細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的目的基因片段正確插入表達(dá)載體的

 

和

 

之間．
（3）在導(dǎo)入表達(dá)載體時(shí)常用Ca⁺處理酵母菌，使其成為

 

細(xì)胞，再與表達(dá)載體于緩沖液中混合，在一起的溫度下完成轉(zhuǎn)化．
（4）為了檢測(cè)目的基因是否成功翻譯，可以用

 

技術(shù)，若沒(méi)有出現(xiàn)相應(yīng)的雜交帶，則可能需要用

 

做探針來(lái)檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄出mRNA．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的應(yīng)用

專題：

分析：分析題圖：A表示從基因組文庫(kù)中獲取含有目的基因的菌株；B表示逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；C表示從基因組文庫(kù)中篩選獲得含有目的基因的菌株．基因組文庫(kù)是指將某生物的全部基因組DNA切割成一定長(zhǎng)度的DNA片段克隆到某種載體上形成的信使，而cDNA文庫(kù)是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達(dá)，所以cDNA文庫(kù)小于基因組文庫(kù)．

解答： 解：（1）①基因組文庫(kù)包含某種生物所有的基因，而cDNA文庫(kù)是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達(dá)，cDNA文庫(kù)只包含某種生物部分基因，所以cDNA文庫(kù)小于基因組文庫(kù)．
②B過(guò)程是逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶．根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，A、C過(guò)程可以使用同一種探針篩選含目的基因的菌株．
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構(gòu)建的文庫(kù)中分離外，還可以分別利用圖中DNA和cDNA為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增．PCR技術(shù)是在高溫條件下進(jìn)行的，該過(guò)程中所用酶要耐高溫．
（2）T₄DNA連接酶能連接平末端的磷酸二酯鍵，使目的基因與質(zhì)粒連接起來(lái)．為使目的基因在酵母菌細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的目的基因片段正確插入表達(dá)載體的 啟動(dòng)子和終止子之間．
（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時(shí)，常用Ca⁺處理酵母菌，使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞，再與表達(dá)載體于緩沖液中混合，在一起的溫度下完成轉(zhuǎn)化．
（4）檢測(cè)目的基因是否整合到受體細(xì)胞的染色體上，可通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)；檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄形成mRN，可通過(guò)分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)．這兩種技術(shù)都需要用帶標(biāo)記的目的基因做探針．檢測(cè)目的基因是否成功翻譯，可以用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案：（1）①大于       ②逆轉(zhuǎn)錄酶     可以        ③DNA     cDNA          耐高溫
（2）T₄         磷酸二酯       啟動(dòng)子         終止子
（3）感受態(tài)
（4）抗原-抗體雜交        帶標(biāo)記的目的基因

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因操作的基本過(guò)程弄清cDNA文庫(kù)和基因組文庫(kù)的差別、基因表達(dá)載體的構(gòu)成、目的基因獲取途徑和導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是正確解答該題的前提．