Question

9．如表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．

限制酶	MseⅠ	PstⅠ	EcoRⅠ	SmaⅠ	XmaⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（1）限制酶SmaⅠ和XmaⅠ作用的不同點(diǎn)是切割位點(diǎn)不同．
（2）圖2中的目的基因D需要使用MetⅠ和PstⅠ剪切才能獲得，因而需要對(duì)圖1所示的運(yùn)載體進(jìn)行改造，構(gòu)建新的限制酶酶切位點(diǎn)，試幫助完成構(gòu)建過(guò)程（填括號(hào)中物質(zhì)的序號(hào)）：首先用①處理質(zhì)粒；然后用⑤處理質(zhì)粒，使被切開(kāi)的質(zhì)粒末端連接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用④處理質(zhì)粒，形成相應(yīng)的限制酶酶切割位點(diǎn)，它可被②識(shí)別．（構(gòu)建需要的所有條件如下：①EcoRⅠ②MseⅠ③PstⅠ④DNA連接酶⑤DNA聚合酶）
（3）檢測(cè)篩選是一個(gè)重要步驟，圖3表示在一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種方法與培養(yǎng)方法，以檢測(cè)基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入大腸桿菌，培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有四環(huán)素和青霉素．從篩選結(jié)果分析，含目的基因的是4、6（填圖中編號(hào)）菌落中的細(xì)菌．

Answer 1

分析 分析表格：限制酶Sma I的識(shí)別序列是CCCGGG，在C和G之間切割；限制酶Xma I的識(shí)別序列是CCCGGG，在第一個(gè)C和第二個(gè)C之間切割．
分析圖1、圖2：質(zhì)粒只有EcoR I酶和Pst I酶的識(shí)別位點(diǎn)，外源DNA分子含有Mse I酶、EcoR I酶和Pst I酶識(shí)別位點(diǎn)，且切割獲得目的基因需要Mse I酶和Pst I酶．
分析圖3：質(zhì)粒上含有兩個(gè)抗性基因，即四環(huán)素抗性基因和青霉素抗性基因．對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造時(shí)，已將青霉素抗性基因破壞，所以含重組質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生存，但在含有青霉素的培養(yǎng)基上不能生存．

解答 解：（1）分析表格可知，限制酶SmaⅠ和XmaⅠ作用的切割位點(diǎn)不同．
（2）分析圖解可知，圖2中的目的基因D需要使用MetⅠ和PstⅠ剪切才能獲得，因而需要對(duì)圖1所示的運(yùn)載體進(jìn)行改造，對(duì)質(zhì)粒改造使，需構(gòu)建新的限制酶酶切位點(diǎn)．首先用①EcoRⅠ處理質(zhì)粒；然后用⑤DNA聚合酶處理質(zhì)粒，使被切開(kāi)的質(zhì)粒末端連接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用④DNA連接酶處理質(zhì)粒，形成了的限制酶酶切割位點(diǎn)，這樣它可被②MetⅠ識(shí)別．
（3）由圖可知，質(zhì)粒上含有兩個(gè)抗性基因，即四環(huán)素抗性基因和青霉素抗性基因．對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造時(shí)，已將青霉素抗性基因破壞，所以含重組質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生存，但在含有青霉素的培養(yǎng)基上不能生存．所以圖中培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有四環(huán)素和青霉素，在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上能生存，在含有青霉素的培養(yǎng)基上不能生存的4和6菌落就是含有目的基因的菌落．
故答案為：
（1）切割位點(diǎn)不同
（2）MetⅠ和PstⅠ①⑤④②
（3）四環(huán)素    青霉素     4、6

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作工具及具體的操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合題干信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．