Question

5．正常細(xì)胞中含有抑癌的P53基因，能表達(dá)抗病毒蛋白，幫助修復(fù)輕度變異的基因，也能使重度變異的細(xì)胞發(fā)生凋亡而避免腫瘤發(fā)生；若它失活而不能表達(dá)，則基因突變的細(xì)胞易形成腫瘤．基因治療腫瘤是根本的方法，腺病毒以其嗜好增殖細(xì)胞和對(duì)人體基本無(wú)害而成為良好的基因載體．野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1，因此需要重新構(gòu)建有療效的、安全的腺病毒．圖甲、乙中箭頭所指為相應(yīng)限制酶切點(diǎn)．

（1）構(gòu)建重組腺病毒時(shí)，限制酶最好選擇EcoRI和BamHI，這樣既可以去除E1基因以防止病毒復(fù)制后損傷健康細(xì)胞，同時(shí)還能破壞55Kda基因以防止其抑制P53基因的活性．
（2）將目的基因與腺病毒重組時(shí)，重組的成功率較低，依然還有大量非重組的野生型病毒的DNA，這是因?yàn)榍邢缕�段有可能與原基因重新結(jié)合．
（3）要獲得更多重組病毒，采用的方法是：獲取人體某腫瘤細(xì)胞→將E1 基因?qū)�入腫瘤細(xì)胞的基因組中→重組病毒侵染含E1基因的腫瘤細(xì)胞→體外培養(yǎng)侵染的細(xì)胞．該過(guò)程中利用腫瘤細(xì)胞能不斷復(fù)制的特點(diǎn)可以為病毒提供更多的生活場(chǎng)所，那么選用含E1基因的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行重組病毒侵染的理由是可以讓病毒僅在含有E1基因的腫瘤細(xì)胞中復(fù)制，而在不含E1的人體正常細(xì)胞中不能復(fù)制，提高安全性．篩選重組病毒，可采用離心分層純化法，其依據(jù)是重組病毒與非重組病毒的DNA分子長(zhǎng)度不同，質(zhì)量（密度）也不同．
（4）某DNA 分子片段含有1000 個(gè)堿基對(duì)．經(jīng)擴(kuò)增后，分別只用限制酶EcoRI 與同時(shí)用EcoRI和HalⅢ兩種方法切割，其電泳結(jié)果如圖丙所示，可推斷限制酶HalⅢ在該DNA片段上的切割點(diǎn)有2個(gè)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖甲為野生型腺病毒DNA，其中含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1，因此構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)應(yīng)破壞或去除55Kda基因和基因E1；圖乙為人體DNA片段，其中P53基因?yàn)槟康幕�因．要獲得目的基因（P53基因），同時(shí)還要破壞或去除55Kda基因和基因E1，應(yīng)選用EcoRI和BamHI切割載體和含有目的基因的DNA．

解答 解：（1）根據(jù)題干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1”可知，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用EcoRI和BamHI切割載體和含有目的基因的DNA，這樣既可以去除E1基因以防止病毒復(fù)制后損傷健康細(xì)胞，同時(shí)還能破壞55Kda基因以防止其抑制P53基因的活性．
（2）由于切下片段有可能與原基因重新結(jié)合，因此將目的基因與腺病毒重組時(shí)，重組的成功率較低，依然還有大量非重組的野生型病毒的DNA．
（3）選用含E1基因的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行重組病毒侵染，可以讓病毒僅在含有E1基因的腫瘤細(xì)胞中復(fù)制，而在不含E1的人體正常細(xì)胞中不能復(fù)制，提高安全性．重組病毒與非重組病毒的DNA分子長(zhǎng)度不同，質(zhì)量（密度）也不同，因此篩選重組病毒時(shí)，可采用離心分層純化法．
（4）只用限制酶EcoRI切割能產(chǎn)生700kb、200kb和100kb三種長(zhǎng)度的DNA片段，同時(shí)用EcoRI和HalⅢ兩種酶切割可產(chǎn)生420kb、280kb和100kb三種長(zhǎng)度的DNA片段，可見(jiàn)，限制酶HalⅢ又將長(zhǎng)度為700Kb的DNA片段切成420kb和280kb兩段，將長(zhǎng)度為200kb的DNA片段切成100kb的兩段，由此可推斷限制酶HalⅢ在該DNA片段上的切割位點(diǎn)有2個(gè)．
故答案為：
（1）EcoRI和BamHI    E1     55Kda     抑制P53基因的活性
（2）切下片段有可能與原基因重新結(jié)合
（3）可以讓病毒僅在含有E1基因的腫瘤細(xì)胞中復(fù)制，而在不含E1的人體正常細(xì)胞中不能復(fù)制，提高安全性       重組病毒與非重組病毒的DNA分子長(zhǎng)度不同，質(zhì)量（密度）也不同
（4）2

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的技術(shù)和原理，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟，能根據(jù)圖甲和圖乙中的限制酶分布位點(diǎn)及題干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1”選擇合適的限制酶；能根據(jù)電泳結(jié)果圖推斷限制酶HalⅢ切割位點(diǎn)數(shù)目．