Question

13．Ⅰ．人們?nèi)找骊P(guān)注食品安全．一種保鮮劑-青鮮素，能抑制植物細(xì)胞生長與分裂，從而抑制發(fā)芽，被用于蔬菜和水果的保鮮，但其殘留物會(huì)損害人體健康，科研人員以小鼠我實(shí)驗(yàn)材料，用“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)”對(duì)青鮮素毒性進(jìn)行了檢測
培養(yǎng)前，對(duì)所取小鼠組織需用胰蛋白酶（膠原蛋白酶）處理，制成細(xì)胞懸液；培養(yǎng)時(shí)，需向培養(yǎng)液中通入5%的CO₂，其目的是調(diào)節(jié)pH；為提供全面的營養(yǎng)，培養(yǎng)液中常常還需要加入動(dòng)物血清（或血漿）等一些天然成分
檢測青鮮素毒性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表：

培養(yǎng)瓶編號(hào)	1	2	3	4	5	6
青鮮素濃度（mg/L）	0	10	30	90	270	810
變異細(xì)胞比例	0	0	$\frac{1}{1{0}^{6}}$	$\frac{1}{1{0}^{6}}$	$\frac{2}{1{0}^{6}}$	$\frac{8}{1{0}^{6}}$

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：低濃度的青鮮素毒性很小，濃度90mg/L以上毒性增加明顯
Ⅱ．為驗(yàn)證某種中藥牙膏是否像其廣告宣傳的一樣具有較強(qiáng)的抑菌功效，某生物興趣小組的同學(xué)設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)（符合無菌操作要求），請(qǐng)分析下述實(shí)驗(yàn)過程并回答下列問題．
①用無菌水漱口，向漱口液中加入適量的該中藥牙膏；
②配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基；
③將上述樣品接種到培養(yǎng)基上，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)；
④一段時(shí)間后，對(duì)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行觀察并進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)
（1）制備牛肉青蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟是：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；培養(yǎng)基在分裝前往往要采用高壓蒸汽滅菌法滅菌
（2）本實(shí)驗(yàn)樣品接種時(shí)最好采用稀釋涂布平板法．培養(yǎng)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，每一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落來源于樣品中的一個(gè)活菌
（3）證明所用培養(yǎng)基已經(jīng)徹底滅菌的方法是：對(duì)未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，如無菌落出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基已徹底滅菌．

Answer 1

分析 1、分析表格，自變量是添加劑中青鮮素濃度，因變量是變異細(xì)胞比例，其中第一組是對(duì)照組，其它是實(shí)驗(yàn)組．
2、培養(yǎng)基在分裝前往往要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌．接種方法有平板劃線法、稀釋涂布平板法等，由于此樣品用固體培養(yǎng)基接種且培養(yǎng)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，所以接種最好采用稀釋涂布平板法；菌落是由單個(gè)細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細(xì)胞種群．檢測大腸桿菌一般使用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要遵循對(duì)照原則和單一變量原則．

解答 解：Ⅰ動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，所取小鼠組織需用胰蛋白酶（膠原蛋白酶）處理，制成細(xì)胞懸液；培養(yǎng)時(shí)，需向培養(yǎng)液中通入5%的C0₂，其目的是調(diào)節(jié)pH，為提供全面的營養(yǎng)，培養(yǎng)液中常常還需要加動(dòng)物血清（或血漿）．
檢查青鮮素的毒性，通常用變異細(xì)胞占全部正常細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)作為指標(biāo)．最后得出結(jié)論：濃度在10 mg/L以下沒有影響，大于90mg/L毒性增加明顯．
Ⅱ（1）培養(yǎng)基在分裝前往往要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌．
（2）因?yàn)榇藰悠酚霉腆w培養(yǎng)基接種且培養(yǎng)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，所以接種最好采用稀釋涂布平板法；菌落是由單個(gè)細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細(xì)胞種群．
（3）證明所用培養(yǎng)某已經(jīng)徹底滅菌的方法是對(duì)未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，如無菌落出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基已徹底滅菌．
故答案為：
Ⅰ胰蛋白酶（膠原蛋白酶）    調(diào)節(jié)pH     動(dòng)物血清（或血漿）
結(jié)論：低濃度的青鮮素毒性很小，濃度90mg/L以上毒性增加明顯
Ⅱ高壓蒸汽滅菌
（2）稀釋涂布平板　 一個(gè)活
（3）對(duì)未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，如無菌落出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基已徹底滅菌

點(diǎn)評(píng) 本題考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記能力和能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)的能力．