Question

6．人血清蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價值．如圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑．

（1）如果HSA基因序列未知，可以采用從基因文庫中提取的方法獲取該目的基因，為了使目的基因能夠在宿主細胞中復(fù)制和穩(wěn)定保存，通常要先構(gòu)建重組DNA后才能導(dǎo)入宿主細胞．
（2）方框中的“？”一般選用的生物是農(nóng)桿菌，為了提高II過程的導(dǎo)入成功率，通常用氯化鈣處理大腸桿菌．
（3）人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活性，所以，選擇I途徑（填I(lǐng)或II）獲取rHSA更有優(yōu)勢．
（4）為了鑒定宿主細胞中是否產(chǎn)生rHSA，可以用C方法來進行檢驗．
A．檢驗HSA基因是否導(dǎo)入          B．檢驗細胞中是否產(chǎn)生相應(yīng)的mRNA
C．抗原、抗體雜交                D．檢測是否有標記基因．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）獲取目的基因的方法有：從基因文庫中獲取、采用PCR技術(shù)擴增（適用于目的基因的核苷酸序列已知的情況下）、人工化學合成（適用于目的基因較小且序列已知的情況下）．因此如果HSA基因序列未知，可以采用從基因文庫中提取 的方法獲取該目的基因；為了使目的基因能夠在宿主細胞中復(fù)制和穩(wěn)定保存，通常要先構(gòu)建基因表達載體（重組DNA）后才能導(dǎo)入宿主細胞．
（2）將目的基因?qū)�入植物細胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，因此方框中的“？”一般選用的生物是農(nóng)桿菌；將目的基因?qū)�入微生物細胞時常有感受態(tài)細胞法，即用氯化鈣處理微生物細胞，使之成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)．
（3）由于大腸桿菌是原核生物，其細胞中不含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，而人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活性，所以，選擇I途徑獲取rHSA更有優(yōu)勢．
（4）檢測目的基因是否表達形成蛋白質(zhì)可以采用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）從基因文庫中提取    重組DNA     
（2）農(nóng)桿菌      氯化鈣
（3）I        
（4）C

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細節(jié)，能結(jié)合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．