Question

【題目】圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

（1）若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現在要培養(yǎng)乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科學家要將該基因通過___________（方法）注入羊的_______________中，發(fā)育完全的母羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。

（2）圖2中的目的基因D需要同時使用MestI和PstI才能獲得，而圖1所示的質粒無限制酶MestI的酶切位點。所以在用該質粒和目的基因構建重組質粒時，需要對質粒進行改造，構建新的限制酶切位點。試幫助完成構建需要的限制酶切位點的過程（提供構建需要的所有條件）：首先用______酶處理質粒；然后用______處理質粒，使被切開的質量末端鏈接上相應的脫氧核苷酸；再用______ 處理質粒形成限制酶切位點，它可被______識別。（供選答案如下：①EcoRI ②MestI ③PstI ④DNA連接酶 ⑤DNA聚合酶）

（3）假設圖1質粒上還有一個PstI的識別序列，現用EcoRI、PstI單獨或聯合切割同一質粒，得到的DNA長度片段如下表。請在下圖中畫出質粒上EcoRI和PstI的切割位點。（標出酶切位點之間的長度）

______

Answer 1

【答案】 顯微注射法 受精卵 ① ⑤ ④ ②

【解析】試題分析：分析圖1、圖2：質粒只有EcoR I酶和Pst I酶的識別位點，外源DNA分子含有Mse I酶、EcoR I酶和Pst I酶識別位點，且切割獲得目的基因需要Mse I酶和Pst I酶。

（1）若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現在要培養(yǎng)乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，使用顯微注射法注射到羊的受精卵中，則發(fā)育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。

（2）對質粒改造使，需構建新的限制酶酶切位點．首先用①EcoRⅠ處理質粒；然后用⑤DNA聚合酶處理質粒，使被切開的質粒末端連接上相應的脫氧核苷酸；再用④DNA連接酶處理質粒，形成了的限制酶酶切割位點，這樣它可被②MetⅠ識別。

（3）圖中看出，圖中質粒為環(huán)狀DNA，經限制酶EcoRⅠ單獨切割后形成一條鏈狀DNA，說明該酶在質粒上有一個切割位點；而限制酶PstⅠ單獨切割，產生了兩條鏈狀DNA，說明該酶在質粒上有兩個酶切位點，并且兩個切點的距離為2.5kb；而兩種酶同時切割時產生三個DNA片段，即限制酶PstⅠ的酶切位點在11.5kb的DNA上，故切割位點如圖