Question

10．如圖是利用大腸桿菌生產(chǎn)埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白的過(guò)程．請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）①利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，反應(yīng)體系內(nèi)要加入含有VP40基因的DNA、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq酶，PCR的全稱是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，第3次復(fù)制的產(chǎn)物中才開(kāi)始出現(xiàn)目的基因．
（2）過(guò)程②構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)選用EcoRI和XhoI雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是防止酶切產(chǎn)物之間的隨意連接，提高連接成功率，目的基因與質(zhì)粒連接形成重組DNA后含有0個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．
（3）基因表達(dá)載體A的組成除了目的基因外，還必須有標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子，過(guò)程③VP40基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，該過(guò)程可稱為轉(zhuǎn)化．
（4）檢測(cè)過(guò)程④是否成功表達(dá)，通常從分子水平進(jìn)行檢測(cè)的方法是抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 1、圖示過(guò)程中，①為獲取目的基因，②為形成重組質(zhì)粒，③為目的基因的導(dǎo)入，④為獲取相應(yīng)的蛋白質(zhì)．
2、PCR技術(shù)的過(guò)程：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸．條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．

解答 解：（1）PCR擴(kuò)增時(shí)，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶．PCR的全稱是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，由于引物A和引物B均不在該片段的端點(diǎn)，因此第一輪循環(huán)后，得到的兩DNA片段中兩條脫氧核苷酸鏈都不等長(zhǎng)；通過(guò)繪圖可推知，第二輪中亦不會(huì)出現(xiàn)等長(zhǎng)的引物，所以在第三輪循環(huán)產(chǎn)物中開(kāi)始出現(xiàn)兩條核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段．
（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來(lái)，因此為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自行環(huán)化，酶切時(shí)可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率；目的基因與質(zhì)粒連接形成重組DNA后，形成的是環(huán)狀DNA，因此含有0個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．
（3）基因表達(dá)載體A的組成除了目的基因外，還必須有標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子；VP40基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，該過(guò)程可稱為轉(zhuǎn)化．
（4）檢測(cè)過(guò)程④是否成功表達(dá)，通常從分子水平進(jìn)行檢測(cè)的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）含有VP40基因的DNA、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶     聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)     3
（2）防止酶切產(chǎn)物之間的隨意連接，提高連接成功率     0
（3）標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子    轉(zhuǎn)化
（4）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題難度不大，綜合性較強(qiáng)，考查了基因工程、PCR等知識(shí)，要求考生具有扎實(shí)的基礎(chǔ)知識(shí)，并構(gòu)建一定的知識(shí)網(wǎng)絡(luò)．